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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文昆蟲激素對家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)基因表達效率影響的研究姓名:王厚偉申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):特種經(jīng)濟動物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師:李衛(wèi)國張志芳2001.5.1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文有所下降:報告基因在蠶體中的有效表達時間可被延長6~8hr。5姍有兩種施用方法:添食和注射,添食施用刪以90ppm的濃度對報告基因表達量的提高效果最好,注射施用以4ug/頭姍的劑量為宜,其中,連同病毒液一次性注射施用姍對表達量的提高效果顯著好于添食使
2、用。隨著MH使用時間的推遲,報告基因的表達水平逐漸降低,結(jié)合對蠶體發(fā)育的影響,MH以在五齡起蠶后48hr與病毒液混合應(yīng)用為宜。在起蠶后48hr注射施用4ug,頭劑量的MH,在病毒感染的穩(wěn)定增長期(感染后84hr之前),MH處理與CK之間報告基因的表達量沒有顯著差異,在對數(shù)增長期(感染后84~108hr),MH處理的報告基因的表達量逐漸高于CK,至降解期(感染后120hr以后)盡管病蠶體重有所下降,但MH報告基因的表達量極顯著高于CK。不
3、同MH使用時間對感染wtBmNPV和rBmNPV家蠶的LT50的影響有顯著差異。早期使用MH,病蠶的LT50較長,晚期使用則顯著縮短。隨著MH使用時間的推遲,病蠶L,T5??傮w變化趨勢是逐漸縮短,其中120hr使用MH較24hr使用MH病蠶的LT50縮短了近10hr。6低劑量的MH對BmBEVS報告基因在蛹體中表達量的提高效果較顯著,其中以2ug/頭MH劑量對polh基因和phy基因表達量的提高效果最好,與對照相比,polh基因的表達量
4、提高了60%左右,植酸酶基因的表達量提高了55%左右。就phy基因而言,其在姍處理的蛹體中的表達量從病毒感染后96hr開始極顯著高于對照,至感染后108hr,報告基因的表達量達最大值。7刪處理與病毒egt基因的缺失對感染家蠶桿狀病毒的家蠶前胸腺形態(tài)發(fā)育有顯著影響。姍處理健康蠶,前胸腺的發(fā)育和激素分泌受到抑制,前胸腺的大小顯著小于CK。wtBmNPV感染家蠶后,由于其基因組中的egt基因表達,使蠶體血淋巴中的蛻皮激素失去生理功能,為了維持
5、蠶體內(nèi)的激素平衡,前胸腺一直處于分泌狀態(tài),從而促進了前胸腺的發(fā)育,其個體大小遠大于對照組。對感染wtBmNPV的家蠶同時使用刪后,外源的刪補償了因egt基因的表達而失活的姍,因此蠶體內(nèi)的激素基本處于正常狀態(tài),前胸腺形態(tài)接近于cK。當(dāng)家蠶感染egt基因失活的重組病毒(DEGT)時,由于沒有egt基因產(chǎn)物對蠶體內(nèi)激素平衡的干擾,所以前胸腺的形態(tài)大致接近于對照組。而當(dāng)DEGT和姍共同作用于家蠶時,體內(nèi)過高的姍抑制了蠶體自身前胸腺的分泌功能,而
6、使前胸腺變小。8姍可促進wtBmNPV在昆蟲培養(yǎng)細胞中的復(fù)制與增殖。在培養(yǎng)的家蠶細胞(BmN)中,當(dāng)姍的使用劑量為3ug/ml培養(yǎng)基時,在病毒感染后60—72hr,培養(yǎng)基中芽生型wtBmNPV的數(shù)目增加了3倍左右。9BaffqPV和AcMNPV協(xié)同感染對家蠶五齡幼蟲LT。。有顯著影響,AcMNPV對接種低濃度的BmNPV在家蠶五齡幼蟲體內(nèi)的復(fù)制具有一定的抑制作用,使其LTso延長10hr左右,而對高接種濃度的BmNPV的抑制作用不明顯。
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