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文檔簡介
1、豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬的高度接觸性傳染病,是豬最重要的傳染病之一,給世界各國養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經濟損失。 CSFVE2基因編碼的E2蛋白為囊膜蛋白,由370個氨基酸殘基組成,是CSFV主要保護性抗原蛋白,能夠誘導機體產生中和抗體。 本試驗設計針對E2基因的特異性引物,通過一步法RT-PCR,以豬瘟兔化弱毒疫苗毒(HCLV)總RNA為模板,擴增獲得E2基因,將PCR產物克隆到pGEM-TEasy載體
2、后測序。然后將該基因插入到pFast-BacHTA載體中,構建重組轉座載體后轉化DH10Bac感受態(tài)細胞,獲得重組Bacmid后轉染sf9昆蟲細胞,傳毒3代,獲得重組表達蛋白。測序結果證實成功克隆CSFVE2基因,其核苷酸序列為1119bp,共編碼373個氨基酸,與HCLVE2基因序列和氨基酸序列進行比較,同源性均達到99.74%。經PCR及雙酶切鑒定,目的基因正確插入pFast-BacHTA轉座載體中,利用載體特異性引物M13進行PC
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