豬瘟病毒E2基因在昆蟲細胞-桿狀病毒中的表達.pdf

1、豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬的高度接觸性傳染病，是豬最重要的傳染病之一，給世界各國養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經濟損失。 CSFVE2基因編碼的E2蛋白為囊膜蛋白，由370個氨基酸殘基組成，是CSFV主要保護性抗原蛋白，能夠誘導機體產生中和抗體。 本試驗設計針對E2基因的特異性引物，通過一步法RT-PCR，以豬瘟兔化弱毒疫苗毒(HCLV)總RNA為模板，擴增獲得E2基因，將PCR產物克隆到pGEM-TEasy載體

2、后測序。然后將該基因插入到pFast-BacHTA載體中，構建重組轉座載體后轉化DH10Bac感受態(tài)細胞，獲得重組Bacmid后轉染sf9昆蟲細胞，傳毒3代，獲得重組表達蛋白。測序結果證實成功克隆CSFVE2基因，其核苷酸序列為1119bp，共編碼373個氨基酸，與HCLVE2基因序列和氨基酸序列進行比較，同源性均達到99.74％。經PCR及雙酶切鑒定，目的基因正確插入pFast-BacHTA轉座載體中，利用載體特異性引物M13進行PC