豬瘟病毒E2基因在昆蟲細(xì)胞-桿狀病毒中的表達(dá).pdf

1、豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬的高度接觸性傳染病，是豬最重要的傳染病之一，給世界各國養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 CSFVE2基因編碼的E2蛋白為囊膜蛋白，由370個(gè)氨基酸殘基組成，是CSFV主要保護(hù)性抗原蛋白，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。 本試驗(yàn)設(shè)計(jì)針對E2基因的特異性引物，通過一步法RT-PCR，以豬瘟兔化弱毒疫苗毒(HCLV)總RNA為模板，擴(kuò)增獲得E2基因，將PCR產(chǎn)物克隆到pGEM-TEasy載體

2、后測序。然后將該基因插入到pFast-BacHTA載體中，構(gòu)建重組轉(zhuǎn)座載體后轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞，獲得重組Bacmid后轉(zhuǎn)染sf9昆蟲細(xì)胞，傳毒3代，獲得重組表達(dá)蛋白。測序結(jié)果證實(shí)成功克隆CSFVE2基因，其核苷酸序列為1119bp，共編碼373個(gè)氨基酸，與HCLVE2基因序列和氨基酸序列進(jìn)行比較，同源性均達(dá)到99.74％。經(jīng)PCR及雙酶切鑒定，目的基因正確插入pFast-BacHTA轉(zhuǎn)座載體中，利用載體特異性引物M13進(jìn)行PC