家蠶桿狀病毒IAP蛋白功能的研究.pdf

1、在昆蟲桿狀病毒基因組中普遍存在一類凋亡抑制基因iap(inhibitor ofapotosis)，最初是在篩選p35同源基因時(shí)發(fā)現(xiàn)的。但隨著對該基因研究的深入，發(fā)現(xiàn)桿狀病毒iap基因并不是都具有細(xì)胞凋亡抑制功能，它可能還具有其他多種生物學(xué)功能。目前在家蠶桿狀病毒（BmNPV）中發(fā)現(xiàn)了兩種IAP蛋白:IAP1和IAP2，但是其具體功能還未可知。
　　因此，本研究以家蠶桿狀病毒(BmNPV)的IAP蛋白為研究對象，通過構(gòu)建iap1、i

2、ap2缺失型和補(bǔ)回型病毒，研究其可能的生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn)IAPI蛋白并不具有抑制BmNPV感染誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用，q-PCR分析結(jié)果表明，其對病毒DNA的復(fù)制及病毒早期基因lef-3、晚期基因vp39和極晚期基因p10的轉(zhuǎn)錄也沒有顯著影響(P＞0.05)。相反，iap2基因具有明顯的抑制細(xì)胞凋亡的作用(P＜0.05)，同時(shí)iap2基因的缺失也將導(dǎo)致不能產(chǎn)生具有感染活性的病毒粒子。
　　此外，為了進(jìn)一步研究iap2基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)

3、制，我們提取了BmNPV感染第5天的家蠶五齡幼蟲脂肪體組織中的總RNA，利用RT-PCR技術(shù)建立了家蠶五齡幼蟲脂肪體組織的基因表達(dá)文庫，并用iap2基因上游啟動(dòng)子區(qū)域113bp的DNA序列作為誘餌序列，利用酵母單雜交系統(tǒng)篩選該基因啟動(dòng)子的結(jié)合蛋白，共篩選出了5個(gè)能與iap2基因啟動(dòng)子序列相結(jié)合的蛋白因子，分別是LEF5、P6.9、BRO-D、ORF1629和ODV-E25。
　　綜上所述，本研究結(jié)果表明BmNPV中IAP1蛋白對病