口蹄疫病毒組合基因在家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)中的表達及差異分析.pdf

1、口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起豬、牛、羊等偶蹄動物的一種烈性傳染病，嚴重危害畜牧業(yè)生產(chǎn)，對國民經(jīng)濟造成巨大的經(jīng)濟損失。目前傳統(tǒng)疫苗在FMD預防控制中仍占主導地位，但因生產(chǎn)成本昂貴、疫苗制備過程中病毒逃逸等潛在危險難以避免等因素，急需研制一種安全、高效的FMD分子疫苗。本研究利用家蠶/桿狀病毒表達系統(tǒng)進行了O型FMDV組合基因的表達及AsiaI型FMDV組合基因在不同家蠶品種中的表達差異分析，為利用家蠶生物反應器生產(chǎn)FMD

2、分子疫苗提供參考依據(jù)。 (1)選用OMⅢ株FMDV衣殼蛋白前體P1、非結構蛋白2A、3C，將其插入家蠶桿狀病毒轉移載體pVL1393中，構建重組質(zhì)粒pVL-P12A3C，與線性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共轉染家蠶BmN細胞，獲得重組病毒Bm-P12A3C。通過免疫熒光技術證明重組病毒能夠正確表達插入的外源基因。將共轉染后的重組病毒感染家蠶5齡幼蟲，雙抗體夾心ELISA法測定目的蛋白在家蠶血淋巴中獲得了表達。對重組病毒進

3、行篩選和純化，將篩選后的重組病毒繼續(xù)感染家蠶5齡起幼蟲，用相同的方法進行檢測，結果表明FMDV抗原在家蠶中獲得了較高的表達。 (2)選用了20個品種的家蠶蠶蛹，注射可以高效穩(wěn)定表達FMDV Asia Ⅰ型P1-2A3C基因的重組病毒，通過雙抗體夾心ELISA方法檢測目的蛋白在蠶蛹中的表達情況，并進行了差異分析。結果表明目的蛋白在各品種家蠶中的表達量存在一定差異，其中以9、10、12、14、15、17號等品種表達量相對較高。