核因子-κB反義基因抑制腎系膜細胞炎性效應的研究.pdf

1、_南京醫(yī)撇學碩士學位論文摘要腎小球固有細胞及局部浸潤的炎癥細胞所分泌的炎癥因子共同決定了腎小球腎炎的發(fā)生、發(fā)展和轉歸。研究證實轉錄因子NFxB在腎小球系膜細胞活化、增殖和炎癥因子的產生中處于中心地位。因此。如何特異性阻斷NFxB活化以減輕腎臟炎性病變已成為人們研究的熱點。反義技術的興起，為特異性阻斷靶基因表達奠定了基礎，提示有可能應用NFKB反義基因特異性阻斷NFxB的活化，從而降低炎性因子的分泌，減輕腎組織損傷。本研究應用反義技術、體

2、外細胞培養(yǎng)技術及分子生物學技術(核酸酶保護法、Western印跡和RTPCR)，對以下三個方面的內容進行了研究，為利用NFxB反義基因類藥物治療腎小球炎性病變提供理論依據(jù)和技術基礎。爪第一觀察陽離子脂質體對人腎小球系膜細胞攝取反義寡核營酸(ODN)的影響，并確定反義ODN轉染系膜細胞的最佳轉染效率，為反義ODN有效載體的選擇提供理論依據(jù)。第二、觀察NFKBp65亞基反義ODN對人腎小球系膜細胞炎癥介質表達的影響，為利用NFKB反義ODN

3、類藥物治療腎小球炎性病變奠定基礎。第三、觀察NFKBp65亞基反義ODN對人腎小球系膜細胞p65mRNA及蛋白表達的影響，探討p65反義ODN的作用機制。研究發(fā)現(xiàn):1.反義ODN轉染系膜細胞后可分布于胞漿及胞核內。脂質體介導的反義ODN大部分進入胞核，而無脂質體介導的反義ODN主要分布于胞漿。2無脂質體介導組轉染系膜細胞6h后轉染效率為11.37%36h達到高峰(53.83%)。脂質體介導組轉染6h攝取率為16.55%18h轉染效率己達

4、到高峰(95.85%)24h仍維持高峰平臺期(95.64%)。反義ODN對系膜細胞的轉染效率呈時間依賴性。3正常培養(yǎng)狀態(tài)下，系膜細胞組成型表達TNFa.IL1p、IL8和TGF邵mRNA，而不表達IL一獻醫(yī)科大學碩士學位論文ABSTRACTInflammatoryfactorssecretedbyrenalintrinsiccellsandinfiltratinginflammatorycellsactontheprogressiono

5、fglomerulonephritis.NFKBpromotestheexpressionofanumberofgenesinvolvedininflammationsuchascytokinesandadhesionmolecules.ClinicalandexperimentaldatasareconfirmingtheroleofactivatedNFKBinmesangialcellshypercellularityandinf

6、lammatoryfactorssecretion.ItisconceivablethatexogenousmodulationofNFxBactivationmayhelptodevisenewtherapeuticapproaches.BecauseofthespecificityofWatsonCrickbasepairingattemptsarenowbeingmadetouseoilgodeoxynucleotide(ODN)

7、inthetherapyofhumandisease.ThepotentialuseofODNasinhibitorsofgenesexpressionishighlighted.Inthisregardweperformedthestudyfromfollowingaspectsbymeansofantisensetechniquecellcultureinvitroandmolecularbiologytechniques.l.To

8、determinetheoptimaleffectofcationiclipidsonantisenseODN(ASODN)uptakeinhumanrenalmesangialcells.2.ToinvestigatetheblockingeffectsofNFxBp65subunitASODNontheproinflammatorycytokineschemokinesandprofibrogenticcytokinesexpres

9、sionofhumanmesangialcells(HMC)andtoprobethepotentialapplicabilityoftheASODNdruginrenalinflammatorydisorders.3.Toexploretheeffectsinp65ASODNonp65expressionofrenalmesangialcellsandthemechanismofinhibitionontargetgenesexpre