肝素對大鼠腎小球系膜細胞和核因子κB的抑制作用.pdf

1、目的 在腎小球炎癥和硬化過程中,系膜細胞的增殖扮演著重要的角色,通過抑制過度增殖的系膜細胞,有利于防治腎小球炎癥的進行性發(fā)展.近年來有不少體外、體內(nèi)試驗證實肝素能抑制系膜細胞增殖,減輕腎臟病變.肝素抗增殖的機制包括:肝素能阻斷細胞周期進程,抑制細胞內(nèi)與增殖相關(guān)的信號傳導(dǎo),如抑制蛋白激酶C和有絲分裂原活化蛋白激酶的活化,調(diào)節(jié)血小板衍化生長因子、表皮生長因子等的合成及功能.核因子κB(NF-κB)是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,介導(dǎo)細胞內(nèi)的信號傳導(dǎo),

2、調(diào)控多種基因的表達.該文通過研究肝素對大鼠腎小球系膜細胞NF-κB的作用及其對系膜細胞增殖的影響,旨在探討肝素抑制系膜細胞增殖的細胞內(nèi)機制.方法 1.大鼠腎小球系膜細胞株購自上海長征醫(yī)院,常規(guī)傳代培養(yǎng).2.四甲基偶氮唑藍(MTT)方法測定細胞增殖:將系膜細胞接種于96孔板,使其貼壁,多數(shù)細胞處于靜止期,分組如下:(1)對照組;(2)脂多糖組;(3)肝素組(肝素+脂多糖):肝素的終濃度分別為3μg/ml、30μg/ml、300μg/ml,

3、每組6個復(fù)孔.培養(yǎng)20小時后用MTT法觀察各組中系膜細胞的增殖水平.3.Western Blot法測定NF-kB蛋白p65的表達:將系膜細胞接種于25cm<'2>的培養(yǎng)瓶中,使其貼壁,多數(shù)細胞處于靜止期,分三組:(1)對照組;(2)脂多糖組;(3)肝素組(肝素+脂多糖):肝素的終濃度為300μg/ml,培養(yǎng)24小時后提取核蛋白,用紫外分光光度法測定核蛋白濃度,用Western Blot法測定NF-κB蛋白p65的表達,重復(fù)3次,結(jié)果用凝