髓核細(xì)胞炎性因子分泌特性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分LDH患者椎間盤(pán)組織中炎性相關(guān)因子表達(dá)的一般特點(diǎn)
　　目的：明確不同類(lèi)型腰椎間盤(pán)突出癥（LDH）患者間盤(pán)組織的病理學(xué)特點(diǎn)，歸納出炎性相關(guān)因子在間盤(pán)組織中表達(dá)分布情況，探討間盤(pán)組織中炎性因子的來(lái)源及其可能病理生理學(xué)意義。
　　方法：選取天津醫(yī)院脊柱外科于2014年12月到2015年9月所收治、確診并接受手術(shù)治療的LDH患者26例。根據(jù)臨床癥狀體征、影像學(xué)檢查（CT、MRI）結(jié)果及術(shù)中所見(jiàn)纖維環(huán)的完整性將所選病例分為兩組

2、：①損傷疝出型椎間盤(pán)突出組（R組）②退變突出型椎間盤(pán)突出組（NR組）。采用HE染色觀察不同分型間盤(pán)組織的病理學(xué)特點(diǎn)，通過(guò)免疫組化、Westernblot等方法檢測(cè)IL-17、IL-23、NLRP3、Caspase-1等炎性相關(guān)因子在間盤(pán)組織中的表達(dá)分布情況，進(jìn)而歸納出炎性相關(guān)因子在組織中表達(dá)的一般特點(diǎn)。
　　結(jié)果：兩種類(lèi)型LDH患者的間盤(pán)組織均表現(xiàn)出退變征象，但損傷疝出組病理表現(xiàn)更為復(fù)雜、退變更加明顯，主要表現(xiàn)為：組織裂隙明顯增多

3、，纖維排列更加紊亂、疏松，甚至斷裂；組織邊緣?？梢?jiàn)纖維素樣壞死、粘液樣變性、滑膜樣化生、鈣結(jié)晶沉積、新生血管長(zhǎng)入、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和軟骨細(xì)胞簇形成等現(xiàn)象。其中細(xì)胞增生和軟骨細(xì)胞簇形成部位間盤(pán)退變也較為明顯。免疫組化可知IL-17、IL-23、NLRP3、Caspase-1等在兩種類(lèi)型的間盤(pán)組織中均有表達(dá)，且損傷疝出型表達(dá)含量高于退變突出型；各炎性相關(guān)因子在軟骨樣的髓核細(xì)胞中均可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，且在組織裂隙周?chē)乃韬思?xì)胞中、軟骨細(xì)胞簇中、浸潤(rùn)的炎

4、性細(xì)胞周?chē)靶律苤車(chē)?yáng)性表達(dá)結(jié)果尤為明顯。
　　結(jié)論：1.兩種類(lèi)型LDH患者的間盤(pán)組織病理學(xué)差異較為明顯，提示可能有更多的機(jī)制參與間盤(pán)組織損傷疝出后的病理表現(xiàn)。增生細(xì)胞和軟骨細(xì)胞簇部位組織退變程度明顯，提示軟骨細(xì)胞簇形成在間盤(pán)病理變化中可能發(fā)揮著一定的作用。2.間盤(pán)細(xì)胞能夠分泌炎性相關(guān)因子，且在間盤(pán)細(xì)胞增生處和軟骨細(xì)胞簇中表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，提示間盤(pán)細(xì)胞可能與浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞一起在間盤(pán)突出后誘發(fā)的炎癥過(guò)程中發(fā)揮著一定的作用。
　

5、　第二部分體外培養(yǎng)人髓核細(xì)胞炎性相關(guān)因子分泌特性的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:腰腿疼痛是間盤(pán)源性相關(guān)疾病的主要癥狀，炎癥作為疼痛的主要誘因，在其中可能發(fā)揮著重要的作用。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)炎癥的主要介質(zhì)炎性因子在病變的間盤(pán)中表達(dá)升高，支持上述假說(shuō)，但其來(lái)源尚有一定的爭(zhēng)論，人間盤(pán)細(xì)胞是否能分泌炎性因子及其分泌特點(diǎn)尚鮮有研究報(bào)道，本部分?jǐn)M對(duì)此進(jìn)行初步的探究。
　　方法：取退變突出型LDH患者術(shù)中摘除的間盤(pán)組織，仔細(xì)分離培養(yǎng)后獲得髓核細(xì)胞，采用P

6、2代進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。采用番紅O、甲苯胺藍(lán)、瑞士姬姆薩染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色等技術(shù)對(duì)髓核細(xì)胞進(jìn)行鑒定。對(duì)髓核細(xì)胞進(jìn)行饑餓處理或脂多糖（LPS）刺激一段時(shí)間后(4h、16h、24h、48h)，采用RT-PCR法檢測(cè)炎性相關(guān)因子IL-1β、IL-12、IL-17、IL-23、TNF-α、EBI3、IL-37的表達(dá)情況，同時(shí)采用ELISA方法對(duì)髓核細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-1β、IL-17、TNF-α的蛋白含量進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證。
　　結(jié)果：經(jīng)鑒

7、定所培養(yǎng)細(xì)胞為髓核細(xì)胞，通過(guò)PCR發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)狀態(tài)下髓核細(xì)胞中不僅有 IL-1β、IL-12、IL-17、IL-23、TNF-α等炎性因子的表達(dá)，也有抗炎因子EBI3(IL-35)、IL-37的表達(dá)，且經(jīng)饑餓或LPS刺激后其表達(dá)量較基礎(chǔ)狀態(tài)下明顯增高。采用ELISA方法從蛋白角度對(duì)IL-1β、IL-17、TNF-α在細(xì)胞培養(yǎng)液的含量進(jìn)行檢測(cè)，也呈現(xiàn)出相似的表達(dá)特點(diǎn)。
　　結(jié)論：人髓核細(xì)胞不僅能夠表達(dá)多種炎性因子，也能夠表達(dá)抗炎因子。在