高濃度紫杉醇誘導(dǎo)胞質(zhì)空泡化樣細(xì)胞死亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、細(xì)胞死亡方式有多種類型，包括壞死、凋亡、自噬、有絲分裂災(zāi)變、脹亡、衰老樣的細(xì)胞死亡和副凋亡等。高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的胞質(zhì)空泡化樣細(xì)胞死亡是我們小組最近觀察到的一種新的細(xì)胞死亡現(xiàn)象，該將其歸類于哪種細(xì)胞死亡方式尚無(wú)定論，其分子機(jī)制幾乎完全未知。本論文對(duì)高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的胞質(zhì)空泡化樣細(xì)胞死亡現(xiàn)象的形態(tài)指標(biāo)、生化指標(biāo)等特征進(jìn)行了研究，基于這些特征探討了這一死亡現(xiàn)象的分類歸屬；然后研究了這種死亡方式的分子機(jī)制；最后初步探討了利用紫杉醇誘導(dǎo)空泡化的機(jī)

2、制在體腫瘤治療的可能性。本研究加深了人們對(duì)這種細(xì)胞死亡方式的認(rèn)識(shí)，同時(shí)也為將紫杉醇誘導(dǎo)空泡化的機(jī)制用于臨床提供理論指導(dǎo)。
　　 本文第一章緒論部分概述了不同細(xì)胞死亡方式的主要特征和紫杉醇誘導(dǎo)不同細(xì)胞死亡方式的研究現(xiàn)狀，同時(shí)說(shuō)明了本論文的研究目的和意義。
　　 本論文實(shí)驗(yàn)部分主要分為三部分：
　　 第一部分：利用共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀和Western Blot等技術(shù)研究了高濃度紫杉醇誘導(dǎo)胞質(zhì)空泡化樣細(xì)胞死亡的特征

3、，結(jié)果如下：1）高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的胞質(zhì)空泡化樣細(xì)胞死亡的沒(méi)有細(xì)胞皺縮反而腫脹，沒(méi)有凋亡小體形成，沒(méi)有細(xì)胞核斷裂，磷脂酰絲氨酸不外翻，對(duì)caspase廣譜抑制劑不敏感，caspase 3不活化等，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果都表明高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡現(xiàn)象不是凋亡；2）高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡中細(xì)胞核沒(méi)有多個(gè)微小細(xì)胞核的形成也不符合有絲分裂災(zāi)變的特征；3）PI染色顯陰性，說(shuō)明細(xì)胞膜完整性沒(méi)有破壞，不符合壞死和脹亡的特征；4）衰老相關(guān)β半乳糖苷酶活性

4、檢測(cè)顯陰性，不符合衰老性細(xì)胞死亡的特征；5）然而卻符合副凋亡的這些主要特征：衍生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細(xì)胞質(zhì)空泡化、線粒體腫脹、沒(méi)有凋亡小體、沒(méi)有核斷裂、caspase不活化、不被caspase的抑制劑抑制等。所以我們認(rèn)為高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的胞質(zhì)空泡化樣細(xì)胞死亡現(xiàn)象應(yīng)歸屬于副凋亡。
　　 第二部分：利用共聚焦顯微鏡和Western Blot等技術(shù)研究了高濃度紫杉醇誘導(dǎo)副凋亡的分子機(jī)制：1）利用蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮（CHX）研究確定了高濃度

5、紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞副凋亡不需要蛋白質(zhì)合成的參與；2）MAPK途徑包括三各成員MEK、JNK、P38，分別利用MEK、JNK、P38的專一性抑制劑，研究了這三條途徑在高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡和細(xì)胞質(zhì)空泡化中的作用，并通過(guò)Western Blot研究了ERK、JNK和P38的活化情況。最后證明高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞副凋亡不需要MAPK途徑參與；3）利用總的活性氧（ROS）的清除劑研究了ROS在高濃度紫杉醇誘導(dǎo)胞質(zhì)空泡化中的作用，表明高濃度紫

6、杉醇不是通過(guò)ROS誘導(dǎo)空泡化產(chǎn)生的；4）共轉(zhuǎn)Bcl-xl-YFP和er-RFP共聚焦顯微鏡動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)觀察Bcl-xl和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的相對(duì)空間位置變化，表明Bcl-xl圍繞在腫脹的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)周圍。但是Bcl-xl的抑制劑HA14-1卻沒(méi)有抑制高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的空泡化，Bcl-xl在高濃度紫杉醇誘導(dǎo)的空泡化中的作用還有待進(jìn)一步研究。
　　 第三部分：在Balb/c小鼠皮下種植腫瘤，然后通過(guò)在體瘤內(nèi)注射紫杉醇的方式利用電鏡技術(shù)研究確定了紫杉醇在體