紫杉醇對(duì)TNF-a誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中Cat K表達(dá)的影響及機(jī)制.pdf

1、背景:
　　 經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)(PTCA)是冠心病治療的一種重要方法,但是大約20％～40％的患者在術(shù)后6個(gè)月出現(xiàn)血管內(nèi)再狹窄。新生內(nèi)膜形成在血管成形術(shù)后再狹窄的發(fā)生中起著重要作用。組織蛋白酶K能降解細(xì)胞外基質(zhì),促進(jìn)VSMC和EC遷移,與內(nèi)膜增生密切相關(guān)。紫杉醇可抑制VSMC和EC的增殖及遷移,能防治支架內(nèi)再狹窄。紫杉醇是否通過(guò)抑制組織蛋白酶K表達(dá)來(lái)減少新生內(nèi)膜形成目前不是很清楚。
　　 目的:
　　

2、觀察紫杉醇對(duì)兔髂動(dòng)脈球囊損傷后新生內(nèi)膜形成和Cat K及NF-κB表達(dá)的影響,探討紫杉醇減輕血管球囊損傷后新生內(nèi)膜形成的機(jī)制。
　　 方法:
　　 40只雄性新西蘭大白兔,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=8)、手術(shù)組(n=16)和紫杉醇組(n=16),均予普通飲食。手術(shù)組和紫杉醇組行右側(cè)髂動(dòng)脈球囊損傷,紫杉醇組術(shù)后在喂食普通飼料的基礎(chǔ)上予腹腔注射紫杉醇2mg/kg,持續(xù)7天或14天。對(duì)照組和手術(shù)組每日均腹腔注射相同體積的生理鹽水

3、。各組分別在術(shù)前1天,術(shù)后1天,術(shù)后第7天和第28天處死兔子時(shí)采血。用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血清TNF-a變化。動(dòng)物喂養(yǎng)在術(shù)后第7天和第28天處死兔子,取右側(cè)髂動(dòng)脈行病理形態(tài)學(xué)檢測(cè),用RT-PCR、Western-blotting和免疫組化方法測(cè)定血管中Cat K的表達(dá),用Western-blotting和免疫組化方法檢測(cè)NF-κB表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.術(shù)前三組血清TNF-a水平無(wú)明顯差異。手術(shù)組術(shù)

4、后第1天、第7天和第28天血清TNF-a水平分別為17.92±3.71,23.65±4.51和19.73±3.83ng/l,較術(shù)前12.97±2.24 ng/l明顯升高,P<0.01。但同一時(shí)間點(diǎn)紫杉醇組與手術(shù)組TNF-a水平差別不是很明顯,術(shù)后第7天TNF-a濃度最高。
　　 2.與正常對(duì)照組相比,手術(shù)組和紫杉醇組內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積(I/M)明顯增加；手術(shù)組術(shù)后7天,28天內(nèi)膜面積和內(nèi)膜與中膜面積比分別為0.19±0.0

5、5mm2,0.35±0.11和0.69±0.11mm2,1.39±0.13,兩者相比,P<0.01。隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),手術(shù)組和紫杉醇組內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積(I/M)明顯增加,紫杉醇組內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積(I/M)比手術(shù)組同一時(shí)間點(diǎn)減少,三組中膜面積在這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著性差異,P>0.05。
　　 結(jié)論:
　　 新西蘭大白兔髂動(dòng)脈球囊損傷后新生內(nèi)膜明顯增厚,內(nèi)膜Cat K和NF-κB表達(dá)均明顯增加,且隨著術(shù)后時(shí)間

6、的延長(zhǎng)增加越多。紫杉醇可能通過(guò)抑制NF-κB活性減少Cat K表達(dá),減輕髂動(dòng)脈球囊損傷后新生內(nèi)膜形成。血清TNF-a水平在兔髂動(dòng)脈球囊損傷后升高,與在兔血管壁中Cat K表達(dá)可能無(wú)直接關(guān)系。
　　 背景:
　　 腫瘤壞死因子-a(TNF-a)是一種重要的促炎癥因子,可以調(diào)控多種炎癥因子和生長(zhǎng)因子的表達(dá)。TNF-a在血管球囊損傷后的新生內(nèi)膜中表達(dá)增加。血管損傷時(shí)導(dǎo)致多種炎癥因子和細(xì)胞因子被激活,這些因子相互作用加重了血管壁

7、的炎癥反應(yīng),促進(jìn)了新生內(nèi)膜的形成。組織蛋白酶K能降解細(xì)胞外基質(zhì),促進(jìn)VSMC和EC遷移,與內(nèi)膜增生密切相關(guān)。TNF-a可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞中Cat K的表達(dá),但是兩者之間的時(shí)效和量效關(guān)系尚不十分清楚。在人的內(nèi)皮細(xì)胞中TNF-a通過(guò)哪些信號(hào)通道促進(jìn)Cat K的表達(dá),也不是很清楚。
　　 目的:
　　 觀察TNF—a不同濃度和不同作用時(shí)間對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中CatK表達(dá)的影響,以及不同信號(hào)通道阻滯劑對(duì)TNF-a引起Cat K

8、表達(dá)的抑制作用,探討TNF-a影響Cat K表達(dá)的機(jī)制。
　　 方法:
　　 采用HUVEC細(xì)胞株傳代3-6代時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞作為研究對(duì)象。細(xì)胞中加入不同濃度的TNF-a作用24h或者加入10ng/ml的TNF-a作用不同時(shí)間。在HUVEC中加入10ng/ml的TNF—a,并分別加入特異性的P38MAPK信號(hào)通道阻滯劑SB203580、P13K信號(hào)通道阻滯劑LY294002和NF-kB通道阻滯劑PDTC作用24h。

9、用RT-PCR方法和western-blotting方法檢測(cè)細(xì)胞中的Cat K mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.正常對(duì)照組HUVEC未見(jiàn)明顯Cat K mRNA表達(dá)。隨著TNF-a濃度的增加,Cat K mRNA的表達(dá)越來(lái)越強(qiáng),0.1ng/ml,1ng/ml和10ng/ml TNF-a組Cat K mRNA表達(dá)分別為0.27±0.03,0.39±0.04和0.50±0.04,兩兩相比,均P<0.01。10

10、ng/mlTNF-a組Cat K mRNA表達(dá)最強(qiáng),100ng/mlTNF-a組Cat K mRNA表達(dá)為0.44±0.06,較10ng/mlTNF-a組反而下降,P<0.05。
　　 2.隨著TNF-a濃度的增加,Cat K的表達(dá)越來(lái)越強(qiáng),0.1ng/ml,1ng/ml和10ng/ml TNF-a組Cat K表達(dá)分別為1.12±0.13,1.55±0.11和1.94±0.10,兩兩相比,均P<0.05。10ng/mlTNF-a

11、組Cat K表達(dá)最強(qiáng),100ng/mlTNF-a組Cat K表達(dá)(1.36±0.56)較10ng/mlTNF-a組表達(dá)減少,P<0.05。
　　 結(jié)論:
　　 TNF-a可以呈劑量和時(shí)間依賴性刺激HUVEC中Cat K表達(dá)。TNF-a可能通過(guò)激活P38、P13K和轉(zhuǎn)錄因子NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)HUVEC中Cat K表達(dá)。
　　 背景:
　　 完整內(nèi)膜在防止血栓形成和再狹窄發(fā)生中起重要作用,延遲血栓形成和延

12、遲再狹窄發(fā)生可能與紫杉醇抑制內(nèi)皮再生有關(guān)。組織蛋白酶K能降解ECM的多種成分,促進(jìn)VSMC和EC遷移,與內(nèi)膜增生密切相關(guān)。NF—kB是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子,可以調(diào)控多種基因產(chǎn)物的表達(dá)。紫杉醇有明顯抑制細(xì)胞遷移的作用,紫杉醇對(duì)組織蛋白酶K表達(dá)的影響目前尚無(wú)研究。紫杉醇能否通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞中NF-kB表達(dá)來(lái)減少Cat K表達(dá),目前尚不清楚。
　　 目的:
　　 觀察紫杉醇對(duì)TNF-a誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中Cat K及NF-kB

13、表達(dá)的影響,探討紫杉醇在防治內(nèi)膜增生的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 采用HUVEC細(xì)胞株傳代3-6代時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞作為研究對(duì)象。用10ng/mlTNF-a刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中的Cat K的表達(dá),并分別加入不同濃度的紫杉醇干預(yù)24小時(shí),用RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞中Cat K mRNA的表達(dá)；用western-blotting方法檢測(cè)細(xì)胞中的CatK和NF-kB蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1

14、.1nmol/l,10nmol/l,100nmol/l和1μmol/l紫杉醇干預(yù)組Cat KmRNA的表達(dá)分別為0.85±0.06,0.68±0.04,0.59±0.02和0.49±0.03,兩兩相比,均P<0.05,均較TNF-a組(1.02±0.07)表達(dá)減少,均P<0.05。紫杉醇可以呈劑量依賴性地抑制TNF-a所致的HUVEC中Cat KmRNA的表達(dá),紫杉醇濃度越高,抑制Cat K mRNA的表達(dá)越強(qiáng)。
　　 2.1n