加巴噴丁治療雙側(cè)CCI大鼠神經(jīng)病理性疼痛機(jī)制研究.pdf

1、前言:
　　神經(jīng)病理性疼痛在普通人群中的發(fā)病率已超5％，是全球重大公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，其病因機(jī)制復(fù)雜，尚缺乏有效的治療措施。在本課題組前期研究中，已發(fā)現(xiàn)神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角miR-203的表達(dá)水平顯著下降;利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選出蛋白磷酸酶1催化亞基β異構(gòu)體(PPP1CB)等多種蛋白質(zhì)表達(dá)水平發(fā)生了改變。PPP1CB是一種與學(xué)習(xí)記憶等神經(jīng)功能相關(guān)的蛋白催化亞基，可能在神經(jīng)病理性疼痛機(jī)制中發(fā)揮著作用。
　　目的:
　

2、　本研究選用雙側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠作為神經(jīng)病理性疼痛模型，利用加巴噴丁對(duì)大鼠進(jìn)行治療，旨在明確加巴噴丁對(duì)bCCI大鼠的治療效果，以及加巴噴丁治療對(duì)bCCI大鼠脊髓背角PPP1CB的表達(dá)影響及其與miR-203之間的關(guān)系。
　　方法:
　　48只180-200gSD雌性大鼠，被隨機(jī)分為4組:
　?、貼a(i)ve組(N=12);
　　②SHAM組(N=12):進(jìn)行大鼠雙側(cè)假手術(shù);
　?、踒CCI組(N=12):

3、建立大鼠雙側(cè)CCI模型;
　　④bCCI+GBP組(N=12):bCCI術(shù)前15分鐘一次、術(shù)后第7天起每日兩次，給予加巴噴丁100mg/Kg腹腔注射，連續(xù)7天。
　　監(jiān)測(cè)大鼠的體重、機(jī)械刺激誘發(fā)痛、熱刺激誘發(fā)痛和冷刺激誘發(fā)痛等行為學(xué)指標(biāo)，來(lái)判斷是否建模成功以及加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。術(shù)后第14天處死大鼠，留取脊髓背角(L4-L6)標(biāo)本，分別利用Real-TimePCR與western-blot檢測(cè)PPP1CB的mRNA及蛋白質(zhì)表

4、達(dá)水平變化，并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1.雙側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎(bCCI)模型大鼠雙足熱刺激誘發(fā)痛痛閾、機(jī)械刺激誘發(fā)痛痛閾及丙酮法冷刺激縮足反射閾閾值較正常對(duì)照組、假手術(shù)組顯著降低，體重顯著下降。術(shù)后第7天開(kāi)始加巴噴丁100mg/Kgbid干預(yù)后，bCCI+GBP大鼠體重、雙足冷刺激誘發(fā)痛閾值與bCCI未干預(yù)組無(wú)顯著差異，而雙足熱刺激誘發(fā)痛閾值、機(jī)械刺激縮足反射閾值均較未干預(yù)組有顯著恢復(fù)。
　　2.在雙側(cè)坐

5、骨神經(jīng)結(jié)扎模型中，大鼠脊髓背角(L4-L6)PPP1CB蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照組、假手術(shù)組有顯著上升，約2倍左右，而PPP1CB mRNA表達(dá)水平則顯著下降約0.8倍左右。術(shù)后第7天開(kāi)始加巴噴丁100mg/Kgbid干預(yù)后，bCCI+GBP組大鼠脊髓背角(L4-L6)PPP1CB蛋白表達(dá)水平較未干預(yù)組有顯著回落，但未恢復(fù)到正常對(duì)照組、假手術(shù)組水平，而PPP1CB mRNA表達(dá)水平則較未干預(yù)組有顯著回升，恢復(fù)到與正常對(duì)照組、假手術(shù)組相同水

6、平。
　　3.利用生物信息學(xué)，驗(yàn)證了miR-203對(duì)PPP1CB的調(diào)控關(guān)系，解釋了PPP1CB在脊髓背角的差異表達(dá)可能是因?yàn)閙iR-203本身對(duì)PPP1CB起到負(fù)向調(diào)控作用，而bCCI大鼠脊髓背角miR-203的減少導(dǎo)致了PPP1CB蛋白表達(dá)水平的上升。
　　結(jié)論:
　　1.加巴噴丁可以緩解神經(jīng)病理性疼痛大鼠雙足對(duì)熱敏、機(jī)械敏感的癥狀，但對(duì)冷刺激感覺(jué)異常無(wú)效果。
　　2.加巴噴丁可以改變大鼠脊髓背角PPP1CB的