蟬蛻抗支氣管哮喘作用及其機制研究.pdf

1、目的：支氣管哮喘是常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，屬于中醫(yī)的“哮病”范疇。近年來，隨著大氣污染嚴重，支氣管哮喘成為全球性的嚴重健康難題，全世界絕大部分國家的各年齡層的人群均受到該疾病的困擾。現(xiàn)代醫(yī)學對本病的研究雖已取得一定的成果，但也存在著爭議。中藥治哮病歷史悠久。蟬蛻“止咳平喘，主治咳嗽氣喘證”，在臨床中廣泛應用，取得很好治療效果。本文研究證實蟬蛻水提物具有抗支氣管哮喘的作用，并圍繞哮喘發(fā)病機理，探討其可能的作用機制，以期為臨床用藥提供理論依

2、據(jù)。 方法： 1 蟬蛻鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的整體動物實驗研究 (1)鎮(zhèn)咳作用采用濃氨水噴霧法，把40只合格小鼠隨機分為四組：模型對照組(model control group，M)、蟬蛻水提物高劑量組(high-dose Periostracum Cicadae extractgroup，H)，蟬蛻水提物低劑量組(low-dose：Periostracum Cicadae extract group，L)和咳必清

3、對照組(pentoxyerine control group，P)，記錄小鼠從接受噴霧開始到出現(xiàn)咳嗽的潛伏期，以及2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。 (2)祛痰作用采用氣管段酚紅法，把60只小鼠隨機分為四組：M、H、L和甘草片對照組(FG)。根據(jù)酚紅標準曲線，折算出酚紅含量(ug/ml)。比較各給藥組之間酚紅排泌量的差異。 (3)平喘作用采用噴霧致喘法，合格豚鼠32只隨機分為四組：M、H、L和氨茶堿對照組(aminophylline

4、 control group，A)，每組8只。以溴化乙酰甲膽堿(acetylcholine bromide，Ach)和(或)磷酸組胺(histamine phosphate，His)定量恒壓噴霧5s，記錄每只豚鼠的引喘潛伏期。 2 蟬蛻對豚鼠離體氣管環(huán)作用實驗研究 取400～550g豚鼠用木捶猛擊頭部致昏，迅速分離氣管，制成3～5mm左右的氣管環(huán)。置于含改良的Krebs營養(yǎng)液15ml的浴槽中，浴液溫度保持37℃，持續(xù)通以

5、95％O<,2>+5％CO<,2>的混合氣體，平衡1.5h，靜息張力2g，每15min更換K-R液一次。然后進行如下實驗：(1)蟬蛻水提物(CPE)對豚鼠離體氣管基礎(chǔ)張力的影響；(2)CPE對His或Ach收縮反應的拮抗作用及時效曲線的影響；(3)CPE對累加法作His或Ach收縮離體氣管平滑肌量效曲線的影響。 3 蟬蛻對哮喘大鼠血清和肺組織形態(tài)學影響及其藥理機制探討 采用卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)致敏激發(fā)大

6、鼠哮喘模型，建立正常對照組(normal control group，N)、哮喘模型組(model group，M)、H、L及地塞米松對照組(Dexcmethasone control group，Dex)。實驗結(jié)束后，斷頭取血，采用放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)測定各組大鼠血清中白細胞介素2(Interleukin 2，IL-2)、白細胞介素5(Interleukin 5，IL-5)、一氧化氮(nitric

7、 oxide，NO)、一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase，NOS)、血栓素B<,2>(TXB<,2>)、6-酮-前列腺素F<,1α>(6-keto—PGFla)的含量。并取肺組織用蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin，HE)染色后，觀察比較大鼠支氣管及其周圍組織形態(tài)學的改變。 結(jié)果： 1 蟬蛻鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的整體動物實驗研究 (1)鎮(zhèn)咳作用結(jié)果可見，H組(38.60±8.3

8、2)、L組(32.20±14.01)與M組(18.70±9.21)相比小鼠咳嗽潛伏期均明顯延長(P<0.01，P<0.05)：H組(8.10±3.25)、L組(8.90±3.57)與M組(12.70±6.11)相Lgd,鼠2min內(nèi)咳嗽次數(shù)均明顯減少(P<0.01，P<0.05)。 (2)祛痰作用結(jié)果可見，H組(0.95±0.61)、L組(1.00±0.55)與M組(0.54±0.32)相比均能增加小鼠酚紅排泌量(即氣管段排痰量

9、)，具有明顯的意義(P<0.05)。L組促進氣管段酚紅排泌量優(yōu)于H組，建議蟬蛻用于祛痰作用時可適當降低用量。 (3)平喘作用 ①CPE對4％Ach誘導豚鼠哮喘作用結(jié)果可見：H組(75.50±12.28)、L組(71.83±21.76，)與M組(58.83+21.20)相比沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)，即CPE對4％Ach誘導豚鼠哮喘模型未發(fā)現(xiàn)有平喘作用。 ②CPE對2％Ach和O.1％His等量混合液誘導豚鼠哮

10、喘作用結(jié)果顯示：H組(94.50±9.09)與M組(78.67±16.57)相比，對2％Ach和0.1％His的等量混合液誘導的豚鼠哮喘模型，H組能使哮喘潛伏期明顯延長(P<0.05)，抑制哮喘反應級數(shù)，具有明顯的平喘效果。 2 蟬蛻對豚鼠離體氣管環(huán)作用實驗研究 (1)CPE對靜息狀態(tài)下的離體氣管平滑肌沒有作用，與蒸餾水對照組相比差異不大，沒有明顯的統(tǒng)計學意義。 (2)CPE對His和Ach引起的豚鼠支氣管平滑肌

11、收縮沒有拮抗作用，與蒸餾水對照組相比沒有顯著性意義，不存在時效關(guān)系和量效關(guān)系。 3 蟬蛻對哮喘大鼠血清和肺組織形態(tài)學影響及其藥理機制探討 (1)體征觀察OVA敏化大鼠表現(xiàn)為前10min煩躁不安、活動頻繁，后20min靜伏不動、毛發(fā)豎立、萎靡不振，嚴重者出現(xiàn)伸頸、縮胸、收腹等明顯喘息癥狀。表明造模成功。 (2)蟬蛻對哮喘大鼠模型支氣管和肺組織形態(tài)學影響N組：支氣管，肺組織結(jié)構(gòu)正常，各級支氣管上皮完整，管腔內(nèi)無粘液滲

12、出，炎性細胞浸潤少見。M組：支氣管粘膜上皮細胞嚴重壞死，脫落，管腔狹窄管壁不光滑，甚則部分上皮缺如，粘液腺增生，基底膜增厚，管腔內(nèi)有大量粘液滲出，支氣管、肺組織內(nèi)有大量炎癥細胞浸潤，且以Eos為主。管周輕度充血、水腫，血管擴張。Dex組：肺部基本正常，支氣管上皮粘膜完整，腔內(nèi)無滲出物，有時可見杯狀細胞增生和輕度炎癥細胞浸潤。H組：大劑量治療組同M組相比，大鼠支氣管，肺組織炎癥細胞浸潤明顯減少，管壁基本光滑，管腔內(nèi)滲出物減少，基底膜增生減

13、輕。L組：組織學表現(xiàn)基本同H組，支氣管上皮完整，管腔分泌物少，少量炎癥細胞浸潤，基底膜增生不明顯。 (3)蟬蛻對哮喘大鼠血清中生化指標影響 ①蟬蛻對哮喘大鼠血清中IL-2、5的影響結(jié)果顯示：M組大鼠血清中IL-2、5(10.96±0.94、31.13±2.23)與N組(7.73±0.81、20.19±1.52)比較明顯升高，差異有顯著性(P<0.01)。H組(9.45±0.94、27.72±1.77)與M組(10.96±

14、0.94、31.13±2.23)相比血清中IL-2、5的含量均有明顯降低，具有顯著性意義(P<0.01)。L組(9.94+1.0 1、28.70±1.58、)與M組(10.96±0.94、31.13±2.23)相比，血清中IL-2、5的含量也明顯降低，具有明顯意義(P<0.05)。 ②蟬蛻對哮喘大鼠血清中NO、NOS的影響結(jié)果顯示：M組(92.17±15.67)與N組(36.76±8.32)血清中NO水平比較，明顯升高，差異有顯

15、著性(P<0.01)。H組(59.09+9.62)、L組(65.16+7.46)與M組(92.17±15.67)相比，血清中的NO含量均有明顯降低，具有顯著性意義(P<0.01.P<0.05)。M組(21.15±2.84)與N組(19.03±1.91)血清中NOS水平比較，差異沒有顯著性(P>0.05)；而各給藥組與M組血清中NOS的水平?jīng)]有明顯的差異，沒有統(tǒng)計學意義。 ③蟬蛻對哮喘大鼠血清中TXB<,2>和6-keto*PGF

16、<,1α>影響結(jié)果顯示：M組(6.38±2.44)較N組(0.90±0.18)血清中TXB<,2>/6-Keto-PGF<,1α>。 結(jié)論： 1 在整體水平，CPE具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，其鎮(zhèn)咳、祛痰作用更為明顯。 2 CPE對于靜息狀態(tài)下的豚鼠支氣管平滑肌的基礎(chǔ)張力沒有影響，并且對His和Ach引起的豚鼠支氣管平滑肌收縮沒有拮抗作用。實驗結(jié)果表明其對整體動物的平喘作用并不是通過直接舒張支氣管平滑肌發(fā)揮作用。

17、 3 CPE能夠降低過敏反應大鼠血清中致炎因子IL-2、5的水平，影響信號分子NO，減少炎癥介質(zhì)(PGs，TXB<,2>)釋放及對周圍組織的浸潤，從而改善支氣管、肺組織形態(tài)學病理改變，降低氣道高反應(air way hyperactivity，AHR)。 本文提示CPE在整體水平具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，但其抗支氣管哮喘的藥理機制并不是通過直接擴張支氣管平滑肌作用來實現(xiàn)的，可能是通過降低致炎因子(IL-2、5)和炎癥介質(zhì)(