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1、為了更方便、直觀地優(yōu)化對(duì)造血干/祖細(xì)胞或鼠紅白血病細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)條件和檢測(cè)外源性基因的表達(dá),我們構(gòu)建了以EGFP基因?yàn)闃?biāo)記基因的反轉(zhuǎn)錄病毒載體,并從轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及EGFP的表達(dá)等方面比較了CMV及SV40啟動(dòng)子對(duì)EGFP表達(dá)的影響.結(jié)果表明：1.成功構(gòu)建了攜帶外源CMV啟動(dòng)子及EGFP基因的反轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXCG,并與以往構(gòu)建的攜帶SV40啟動(dòng)子及EGFP基因的反轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSE作了比較.從轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及EGFP的表
2、達(dá)等方面的分析顯示CMV啟動(dòng)子促進(jìn)EGFP表達(dá)的作用更強(qiáng),pLXCG是進(jìn)行體外富集轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的理想載體.2.用所構(gòu)建的pLXCG及β基因重組體經(jīng)高效包裝細(xì)胞系GP-293包裝,以VSV-G作為包膜蛋白,獲得了高滴度的病毒.3.以pLXCG為基本框架,構(gòu)建了3個(gè)β基因理組體：pLXCGHS2Δβ2.0（340bp）、pLXCGHS32Δβ2.0（1.1kb）、pLXCGHS3Δβ2.0（780bp）.以重組病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)MEL細(xì)胞,FACS分析
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