超順磁性氧化鐵納米顆粒與增強型綠色熒光蛋白標記內皮祖細胞的體外研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學碩士學位論文超順磁性氧化鐵納米顆粒與增強型綠色熒光蛋白標記內皮祖細胞的體外研究姓名：張文高申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學神經外指導教師：楊學軍20090501天津醫(yī)科大學碩士學位論文終向內皮細胞發(fā)展；多數(shù)細胞表達CD34抗原，部分未表達，說明外周血中的CDl33／CD34。亦可誘導形成EPC而表達VEGFR2抗原。2普魯士藍染色后，鏡下觀察細胞內鐵陽性呈藍色，SPIO未進入細胞核，均處于胞質內，高濃度SPIO和脂質體介導均有

2、利于EPCs攝取更多的鐵。將有、無脂質體介導且含SPIO濃度不同的培養(yǎng)基培養(yǎng)后的細胞用PBS重懸，M對檢測T2WI像顯示隨細胞內SPIO含量的增多，信號減低效果亦逐漸增強，5099／mLSPIO轉染試劑標記的EPCs雖能使MRI信號明顯降低，但細胞狀態(tài)不良，易脫落，顯示出鐵毒性；25pg／mLSPIO脂質體標記的細胞生長形態(tài)好，臺盼藍染色顯示細胞活性不受抑制，M對信號改變亦能清晰顯示，以此濃度標記細胞可以達到體內示蹤要求。透射電鏡觀察S

3、PIO納米顆粒，未經充分漩渦振蕩或超聲分散前，膠體液中SPIO易聚集，顆?？蛇_100nm；充分振蕩分散并經銅網制樣后觀察，顆粒大小較均勻，平均60nm。電鏡下觀察吞噬SPIO的EPCs平均直徑15069m，胞質中可見含有聚集程度不等鐵顆粒的吞噬體。3電泳圖結果示pPGKEGFP經EcoRI和PstI單酶切為線性化質粒后長度約為473kb；XbaI與BamHI雙酶切獲得EGFP片段在750bp，與預期片段長度相符。以六孔板位單位，通過優(yōu)化

4、脂質體和質粒DNA比例，最后確定脂質體12txL、pPGK—EGFP質粒8ng(4／3)時轉染效率最高，達到近30％；臺盼藍染色細胞成活率96％。結論：1免疫磁珠分選CDl33單個核細胞體外誘導培養(yǎng)，簡便高效，是獲取外周血中含量稀少的內皮祖細胞的可靠方法。2SPIO標記結合M砌細胞成像，檢測靈敏度高，效果可靠，是EPCs示蹤的有效方法。3EGFP標iEPCs，熒光蛋白表達穩(wěn)定、特異性強，可以實現(xiàn)對EPCs的監(jiān)測示蹤，為以EPCs為自殺基