增強型黃色熒光蛋白在柔嫩艾美耳球蟲體內的瞬時轉染及表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、球蟲病每年給養(yǎng)雞業(yè)帶來約 20 億美元的經(jīng)濟損失，基于藥物的球蟲病控制策略受到耐藥性和藥物殘留兩大問題的困擾，因此，開發(fā)新型藥物和疫苗是球蟲學界研究的熱點。實現(xiàn)外源基因在柔嫩艾美耳球蟲的轉染是進一步研究雞球蟲的生物學特性、其與宿主的相互作用和宿主的抗球蟲免疫應答用于開發(fā)更加有效的新藥物和新疫苗的必然環(huán)節(jié)。 本實驗旨在建立一個瞬間轉染體系，觀察增強型黃色熒光蛋白(enhanced yellow fluorescentprotein

2、，eyfp) 在柔嫩艾美耳球蟲子孢子體內是否表達。用DEAE-52纖維素柱層析收集子孢子，電擊轉染方法將源于柔嫩艾美耳球蟲自身調控序列構建的載體pH4-2EYFP-Actin3’導入到子孢子的體內，并將轉染的子孢子接種到MDBK細胞上進行體外培養(yǎng)。熒光顯微鏡下觀察到黃色熒光蛋白能夠在子孢子的體內瞬時表達，并且表達黃色熒光蛋白的子孢子能夠侵入MDBK細胞，發(fā)育到第一代裂殖體并釋放出裂殖子，此過程黃色熒光蛋白一直持續(xù)地表達。這表明柔嫩艾美耳

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