增強(qiáng)型黃色熒光蛋白在柔嫩艾美耳球蟲體內(nèi)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及表達(dá).pdf

1、球蟲病每年給養(yǎng)雞業(yè)帶來約 20 億美元的經(jīng)濟(jì)損失，基于藥物的球蟲病控制策略受到耐藥性和藥物殘留兩大問題的困擾，因此，開發(fā)新型藥物和疫苗是球蟲學(xué)界研究的熱點(diǎn)。實(shí)現(xiàn)外源基因在柔嫩艾美耳球蟲的轉(zhuǎn)染是進(jìn)一步研究雞球蟲的生物學(xué)特性、其與宿主的相互作用和宿主的抗球蟲免疫應(yīng)答用于開發(fā)更加有效的新藥物和新疫苗的必然環(huán)節(jié)。 本實(shí)驗(yàn)旨在建立一個(gè)瞬間轉(zhuǎn)染體系，觀察增強(qiáng)型黃色熒光蛋白(enhanced yellow fluorescentprotein

2、，eyfp) 在柔嫩艾美耳球蟲子孢子體內(nèi)是否表達(dá)。用DEAE-52纖維素柱層析收集子孢子，電擊轉(zhuǎn)染方法將源于柔嫩艾美耳球蟲自身調(diào)控序列構(gòu)建的載體pH4-2EYFP-Actin3’導(dǎo)入到子孢子的體內(nèi)，并將轉(zhuǎn)染的子孢子接種到MDBK細(xì)胞上進(jìn)行體外培養(yǎng)。熒光顯微鏡下觀察到黃色熒光蛋白能夠在子孢子的體內(nèi)瞬時(shí)表達(dá)，并且表達(dá)黃色熒光蛋白的子孢子能夠侵入MDBK細(xì)胞，發(fā)育到第一代裂殖體并釋放出裂殖子，此過程黃色熒光蛋白一直持續(xù)地表達(dá)。這表明柔嫩艾美耳