2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:為研究增強型綠色熒光蛋白(EGFP)基因在活細胞中作為報告基因和篩選標記的可行性,特構建其真核表達載體pCDNA3.1(+)-EGFP,并將它轉染至Hela細胞和大鼠骨髓間充質干細胞(MSC)中,觀察其在這兩種細胞中的表達情況。方法:以BamHⅠ和NotⅠ雙酶切分別從真核表達載體pCDNA3.1(+)和EGFP載體pEGFP-1中切取線性化pCDNA3.1(+)載體和目的EGFP基因片段,然后將兩者連接起來,從而獲得重組質粒pCD

2、NA3.1(+)-EGFP,并分別以BamHⅠ單酶切和BamHⅠ、NotⅠ雙酶切進行鑒定。以脂質體轉染試劑LipofectAMINE2000分別將構建好的重組質粒轉染至培養(yǎng)的Hela細胞和大鼠骨髓間充質干細胞中,分別經G418篩選兩周和四周后獲得EGFP陽性克隆,進行細胞爬片后放置在熒光顯微鏡下觀察。結論:EGFP基因能以真核表達載體pCDNA3.1(+)-EGFP的形式在Hela細胞和大鼠骨髓間充質干細胞中成功表達,并發(fā)出綠色熒光,而

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