增強型綠色熒光蛋白（EGFP）基因真核表達載體的構建與表達.pdf

1、目的：為研究增強型綠色熒光蛋白(EGFP)基因在活細胞中作為報告基因和篩選標記的可行性，特構建其真核表達載體pCDNA3.1(+)-EGFP，并將它轉染至Hela細胞和大鼠骨髓間充質干細胞(MSC)中，觀察其在這兩種細胞中的表達情況。方法：以BamHⅠ和NotⅠ雙酶切分別從真核表達載體pCDNA3.1(+)和EGFP載體pEGFP-1中切取線性化pCDNA3.1(+)載體和目的EGFP基因片段，然后將兩者連接起來，從而獲得重組質粒pCD

2、NA3.1(+)-EGFP，并分別以BamHⅠ單酶切和BamHⅠ、NotⅠ雙酶切進行鑒定。以脂質體轉染試劑LipofectAMINE2000分別將構建好的重組質粒轉染至培養(yǎng)的Hela細胞和大鼠骨髓間充質干細胞中，分別經G418篩選兩周和四周后獲得EGFP陽性克隆，進行細胞爬片后放置在熒光顯微鏡下觀察。結論：EGFP基因能以真核表達載體pCDNA3.1(+)-EGFP的形式在Hela細胞和大鼠骨髓間充質干細胞中成功表達，并發(fā)出綠色熒光，而