增強型綠色熒光蛋白標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療帕金森病大鼠.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文增強型綠色熒光蛋白標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療帕金森病大鼠姓名：胡琦申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：朱遂強20090501華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文3第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)、鑒定第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)、鑒定及向多巴胺能神經(jīng)元的分化及向多巴胺能神經(jīng)元的分化目的：目的：研究大鼠MSCs體外培養(yǎng)和增殖能力及紋狀體提取液誘導(dǎo)其分化為多巴胺能神經(jīng)元(dopamin

2、ergicneuron，DN)的潛能。方法：方法：取46周雄性SD大鼠完整的股骨、脛骨，用預(yù)冷的MSCs培養(yǎng)基反復(fù)沖洗骨髓腔，待雙側(cè)股骨、脛骨骨髓腔全部沖洗干凈后，用1ml注射器反復(fù)抽吸骨髓懸浮液，以打散細(xì)胞團(tuán)制成單細(xì)胞懸液，再接種于六孔板培養(yǎng)。待細(xì)胞長至80－90％融合時即可進(jìn)行傳代。采用流式細(xì)胞儀對其進(jìn)行鑒定，后再分為A、B、C3組，前5天每組均用預(yù)誘導(dǎo)液誘導(dǎo)，后10天A組換用1：1體積比稀釋的紋狀體提取液，B組換用1：2體積比稀釋

3、的紋狀體提取液，C組則繼續(xù)用預(yù)誘導(dǎo)液誘導(dǎo)，在誘導(dǎo)后的第5和15天分別行巢蛋白(Nestin)、膠質(zhì)細(xì)胞源性蛋白(GFAP)、神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)和酪氨酸羥化酶(TH)免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，并對DN陽性細(xì)胞行計數(shù)，確定各組DN陽性率。結(jié)果：結(jié)果：MSCs貼壁生長，排列成束狀，漩渦狀或放射狀，梭形細(xì)胞胞漿較豐富，核大，呈卵圓形，核仁明顯，可以維持體外長期培養(yǎng)增殖，傳至15代，細(xì)胞形態(tài)和生長速度均無變化。流式細(xì)胞儀檢測第6代骨髓間充質(zhì)干細(xì)

4、胞，其CD44、CD45、CD90、CD105陽性表達(dá)率分別為98.37％、0.56％、95.55％、84.45％。經(jīng)過誘導(dǎo)后細(xì)胞呈多極或雙極，并表達(dá)Nestin、GFAP、NSE及TH。A、B、C3組在第15天誘導(dǎo)出的DN陽性率分別是(11.90.5)％、(8.30.3)％及(1.60.2)％，經(jīng)x2檢驗A組和C組有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論：結(jié)論：MSCs可以在體外成功分離培養(yǎng)、擴(kuò)增、純化，具有向神經(jīng)細(xì)胞分化的潛能，使用紋狀體提取液能誘導(dǎo)其向