靶向性RNA干擾載體的構(gòu)建及其對MCF-7細(xì)胞hTERT基因表達(dá)和細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文靶向性RNA干擾載體的構(gòu)建及其對MCF7細(xì)胞hTERT基因表達(dá)和細(xì)胞凋亡影響的研究姓名：喬鑫申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤分子遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：稅青林20090501量。MCF7細(xì)胞和造血干細(xì)胞分別設(shè)置實驗組、陰性對照組、CMV對照組、空白對照組。其中，實驗組為攜帶DF3啟動子的hTERT干●擾質(zhì)粒pGenesil10mir30DF3hTERT；陰性對照組為攜帶DF3啟動子而無hTERT干擾序列的質(zhì)粒pGenesil1

2、0mir30DF3腿；CMV對照組為攜帶CMV啟動子的hTERT干擾質(zhì)粒pGenesil10mir30CMVhTERT；空白對照組僅含等量PBS液。以構(gòu)建的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF7細(xì)胞各組和造血干細(xì)胞各組，于轉(zhuǎn)染后24h、36h、48h和72hMTT法檢測乳腺癌MCF7細(xì)胞和造血干細(xì)胞生長情況以及增殖抑制率；于轉(zhuǎn)染后48hELISA法檢測兩類細(xì)胞組中hTERT蛋白濃度的變化；并通過流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果：①重組質(zhì)粒pG

3、enesil10mir30DF3hTERT經(jīng)酶切鑒定以及測序鑒定證實目的序列已準(zhǔn)確插入到預(yù)計位點，DF3啟動子已成功替換原質(zhì)粒中CMV啟動子，符合設(shè)計要求，構(gòu)建成功。②采集臍血50ml，臺盼藍(lán)拒染率100％，臍血采集2小時內(nèi)分離，得細(xì)胞懸液10ml，細(xì)胞計數(shù)10x109，臺盼藍(lán)拒染率99％。轉(zhuǎn)染前經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測造血干細(xì)胞含量為886％。@MTT試驗結(jié)果顯示：乳腺癌MCF7細(xì)胞的實驗組和CMV對照組細(xì)胞生長速度減慢、增殖顯著抑制；造血干