Mammosphere低表達蛋白GIPC1干擾對MCF-7乳腺癌細胞蛋白表達的影響.pdf

1、乳腺癌是最常見的惡性腫瘤之一。隨著腫瘤干細胞概念的提出,以及實體瘤中腫瘤干細胞的成功分離,人們越來越相信腫瘤干細胞是腫瘤的生長,惡化和轉(zhuǎn)移的內(nèi)在原因。本實驗室已經(jīng)利用乳腺癌細胞系MCF-7在體外培養(yǎng)出了mammosphere,并利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對mammosphere和MCF-7細胞進行差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究,共鑒定出34個具有表達差異的蛋白質(zhì)點,其中GIPC1(G-protein signaling-GAIP-interacting p

2、rotein COOHterminus)蛋白在mammosphere中表達下調(diào)。
　　 GIPC1含有PDZ結(jié)構(gòu)域,是細胞中重要的支架蛋白,與蛋白質(zhì)的運輸定位、膜受體蛋白的成簇、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及膜泡運輸?shù)扔嘘P(guān)。為了研究GIPC1蛋白在細胞中的功能及其對mammosphere形態(tài)及生長的影響,實驗利用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)干擾腫瘤干細胞mammosphere低表達蛋白GIPC1的表達,并通過熒光顯微鏡觀察和免疫印跡對其驗證。實驗對穩(wěn)

3、定低表達細胞株和陰性對照細胞株進行mammosphere培養(yǎng)觀察GIPC1的干擾后mammosphere的形態(tài)變化,結(jié)果顯示GIPC1的低表達并沒有引起mammosphere的形態(tài)學(xué)的明顯變化。為了研究GIPC1蛋白低表達對于MCF-7細胞蛋白表達的影響,實驗通過差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析共找到16個差異表達蛋白,利用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜鑒定出其中12個。包括與細胞骨架、糖代謝、核苷酸代謝、線粒體分裂相關(guān)蛋白、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白及干細胞分子