眼鏡蛇神經(jīng)毒素對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 眼鏡蛇神經(jīng)毒素對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用研究。
　　目的：觀察眼睛蛇神經(jīng)毒素(cobrotoxin)體外抗腫瘤作用,并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：以人肺腺癌A549細(xì)胞(野生型P53,wild-typeP53,wtP53)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。通過(guò)四氮唑鹽還原法(MTT)檢測(cè)眼鏡蛇神經(jīng)毒素(cobrotoxin)對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞和HFL1人肺成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率;應(yīng)用細(xì)胞

2、集落平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)cobrotoxin對(duì)A549細(xì)胞的集落形成的影響;應(yīng)用透射電鏡觀察cobrotoxin作用后自噬的發(fā)生;蛋白免疫印跡法(Western blot)測(cè)定單獨(dú)cobrotoxin作用、cobrotoxin分別聯(lián)合3-MA(3-methyladenine,3-甲基腺嘌呤,自噬抑制劑)抑制自噬和SB203580(吡啶咪唑化合物, P38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路特異性抑制劑)抑制P38-MAPK通路活性后A549細(xì)胞內(nèi)Beclin-1、

3、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示不同濃度cobrotoxin對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)均有明顯抑制作用,對(duì)HFL1人肺成纖維細(xì)胞無(wú)顯著抑制作用;不同濃度cobrotoxin可明顯抑制A549細(xì)胞的集落形成;cobrotoxin作用后透射電鏡可觀察到cobrotoxin組較對(duì)照組自噬小體明顯增多,3-MA、SB203580分別干預(yù)后自噬小體有所減少;cobrotoxin作用后Beclin-1、pP

4、38、Ⅱ型LC3蛋白表達(dá)水平明顯提高,P62表達(dá)明顯降低,并有濃度依賴性,3-MA抑制自噬后Beclin-1、Ⅱ型LC3蛋白表達(dá)水平降低,P62表達(dá)增高, SB203580抑制P38-MAPK通路后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表達(dá)水平降低, P62表達(dá)增高
　　結(jié)論：cobrotoxin對(duì)人肺癌A549細(xì)胞體外生長(zhǎng)有抑制作用,其作用與誘導(dǎo)自噬有關(guān),其中誘導(dǎo)自噬作用可能和活化P38-MAPK通路有關(guān)。
　　第二部

5、分 眼鏡蛇神經(jīng)毒素對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用。
　　目的：觀察眼睛蛇神經(jīng)毒素(cobrotoxin)對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞(wtP53)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用,及探討自噬對(duì)cobrotoxin的腫瘤抑制作用的影響。
　　方法：接種人肺腺癌A549細(xì)胞建立裸鼠移植瘤模型,分40ug/kg cobrotoxin組、40ug/kg cobrotoxin+10mmol/kg3MA組、40ug/kg cobrotox

6、in+5mg/kg SB203580組和陰性對(duì)照組4組,按以上規(guī)定劑量在移植瘤周圍皮下注射cobrotoxin,隔日注射一次,共注射10次,同時(shí)陰性對(duì)照組動(dòng)物移植瘤周皮下注射等量生理鹽水。給藥4周后,比較移植瘤瘤重,計(jì)算抑瘤率。
　　結(jié)果：cobrotoxin對(duì)人肺癌A549細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)有抑制作用,抑瘤率為35.7％(cobrotoxin40μg/kg組),3-MA(10mmol/kg)、SB203580(5mg/kg)干預(yù)