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文檔簡介
1、目的:研究RASSF1A基因轉染對肺腺癌細胞A549生長的抑制作用及其可能作用機制.方法:利用脂質體轉染技術將RASSF1A基因導入肺腺癌細胞A549,應用Westernblotting鑒定經(jīng)G418篩選后獲得的克隆,建立高表達RASSF1A基因的肺腺癌A549細胞株.MTT法測定RASSF1A基因轉染前后A549細胞的生長曲線,平板克隆形成實驗和流式細胞儀檢測轉染前后細胞周期的改變,觀察RASSF1A基因轉染對A549細胞生長特性的影
2、響.采用Westernblotting分別檢測RASSF1 A基因轉染前后A549細胞p65在全細胞以及核內的表達;應用RT-PCR檢測p21<'WAF1> mRNA的表達,探討RASSF1A基因的作用機制.結果:1、成功建立高表達RASSF1A基因的肺腺癌A549細胞株;2、RASSF1A-A549細胞生長速度明顯低于A549、pcDNA3.0-A549細胞;RASSF1A-A549細胞的克隆形成率為13.0%,低于A549(18.7
3、%)、pcDNA3.0-A549細胞(18.3%)(P<0.05);3、與A549、pcDNA3.0-A549細胞相比,pcDNA3.0-RASSF1A-A549細胞G1/G0期細胞百分數(shù)明顯增多(90.57%)(P<0.05);4、與A549、pcDNA3.0-A549細胞相比,RASSF1A-A549細胞核內p65蛋白表達明顯降低,而全細胞p65蛋白表達未見明顯變化;5、與A549、pcDNA3.0-A549細胞相比,RASSF1A
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