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1、目的:從廣西眼鏡蛇粗毒中分離純化神經(jīng)毒素,對(duì)其理化性質(zhì)、鎮(zhèn)痛作用及神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究。 方法:用CMSephadexC-25離子交換、SephadexG-50凝膠過(guò)濾層析法分離純化廣西眼睛鏡蛇的神經(jīng)毒素(neurotoxin,NT)。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PAGE)對(duì)分離純化廣西眼睛鏡蛇的神經(jīng)毒素純度進(jìn)行鑒定;以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定其分子量。用硫酸銨鹽析,離子交換柱層析分離純化SD大鼠的轉(zhuǎn)鐵
2、蛋白。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法對(duì)分離純化的轉(zhuǎn)鐵蛋白純度進(jìn)行鑒定。分別應(yīng)用2.亞氨氫氯化硫醇(2-iminothiolane)、異型雙功能連接劑間馬來(lái)酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺(m-Maleimidoben-zoyl-N-hydoxysuccinimide ester,MBS)將大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白、神經(jīng)毒素偶聯(lián),合成神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)體。用Sephacryl S-200凝膠過(guò)濾層析法鑒定偶聯(lián)體的純度,用單向免疫免疫擴(kuò)散法測(cè)定神偶聯(lián)體中
3、的神經(jīng)毒素的量。用小鼠熱板法與醋酸扭體法,觀察神經(jīng)毒素、神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)體的鎮(zhèn)痛作用。 結(jié)果:從廣西眼鏡蛇毒中分離出的NT為單一組分,分子量約為7862Da。在小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)中,神經(jīng)毒素能使小鼠痛閾提高百分率53.4%,神經(jīng)毒素.轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物能使痛閾提高百分率95.1%。小鼠扭體抑制率為57.6%.阿托品能拮抗神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物的鎮(zhèn)痛作用(p<0.01):甲基阿托品未能拮抗神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物的鎮(zhèn)痛作用(p>0
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