人核糖核酸酶抑制因子對腫瘤細胞生長、凋亡、轉移的影響及其機制的研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學博士學位論文人核糖核酸酶抑制因子對腫瘤細胞生長、凋亡、轉移的影響及其機制的研究姓名：陳俊霞申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：崔秀云20040601體瘤的生長中起重要作用，沒有新血管的形成，實體瘤長到卜2mm3時，腫瘤將會自行退化。這些結果提示RI可能起著候選抑癌基因的作用而可能與某些腫瘤的發(fā)生和轉移有關。然而，目前除了RI的抗癌作用與其抑制血管生成的活性外，是否還具有其他抑癌功能以及RI抗癌的確切的分子機

2、制還不清楚。本研究的目的在于進一步了解RI的潛在功能以及探討RI與腫瘤生長、浸潤、轉移的關系，以期闡明RI抗癌的分子機理。本實驗研究甲基化抑制劑對腫瘤細胞中核糖核酸酶抑制因子表達的影響；將人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通過逆轉錄包裝細胞PA317轉染到B16小鼠黑色瘤細胞中，觀察轉染的RI基因在體內(nèi)外對細胞生長、凋亡、以及浸潤、轉移特性的影響；以浸潤和非浸潤的膀胱移行細胞癌細胞系為模型，觀察了RI的表達變化及其對腫瘤細胞浸潤、轉移

3、能力的影響。為此做了以下的一些工作：1用甲基化抑制劑5aza一2’deoxycytidine(5一Aza—CdR)作用人乳腺癌細胞系MCF一7，人胃癌細胞系BGC一823，人前列腺癌細胞系叫一145和人結腸癌細胞系HT一29。通過RT—PCR，蛋白免疫印跡法(westernblotting)，免疫熒光(imaunofluorescence)和免疫細胞化學(immunocytochemistry)技術分析RI基因的表達。結果顯示5Aza—

4、CdR能顯著提高RI基因在人乳腺癌細胞系MCF一7，人胃癌細胞系BGc一823，人的前列腺癌細胞系叫一145的表達，但對人結腸癌細胞系HT一29沒有明顯的影響。結果表明，RI基因可能與胃癌，前列腺癌，和乳腺癌的發(fā)生有關。在人類腫瘤中，許多抑癌基因可通過啟動予區(qū)域異常的甲基化使表達喪失，用甲基化抑制劑5Aza—CdR處理能恢復基因的表達，RI可能在某些組織中具有抑癌基因的功能。2將人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通過逆轉錄包裝細胞PA

5、317轉染到B16小鼠黑色素瘤細胞中，用轉染空載體和未轉染的B16細胞作為對照。通過PCRRT—PCR，蛋白免疫印跡，免疫熒光分析鑒定，獲得穩(wěn)定表達人核糖核酸酶抑制因子的細胞株。結果顯示，轉染的RI基因在體外能顯著地抑制細胞增殖，調(diào)節(jié)細胞周期和誘導凋亡以及引起細胞形態(tài)的改變，將三種B16細胞接種到C57BL／6小鼠中結果，轉染RI基因的實驗組顯著地抑制的了腫瘤的生長，與兩個對照組相比，荷瘤小鼠有更長的存活時間，較長的腫瘤生長潛伏期，更低