16250.核糖核酸酶onconase制備過程優(yōu)化研究

1、華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文第1頁核糖核酸酶onconase制備過程優(yōu)化研究摘要豹蛙酶(0nconase，簡稱0NC)是一種從北極豹蛙卵母細(xì)胞和早期胚胎中提取的核糖核酸酶，屬于RNaSeA超家族，研究證實其對許多腫瘤細(xì)胞和實體腫瘤都具有殺傷作用。以一株表達(dá)豹蛙酶的基因工程菌為研究對象，分別在搖瓶和37L小型發(fā)酵罐中對工程菌發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化，確定了接種量2％、IPTG濃度05mM、誘導(dǎo)時間35小時，菌體內(nèi)豹蛙酶表達(dá)量占胞內(nèi)蛋白總量的30％以

2、上。進(jìn)一步對豹蛙酶的純化工藝進(jìn)行探索，建立了菌體破碎、包涵體洗滌、蛋白復(fù)性、蛋白純化工藝。文章中采用的復(fù)性方法主要是稀釋復(fù)性。為得到最優(yōu)的復(fù)性條件，本實驗對不同復(fù)性溫度研究，結(jié)果表明當(dāng)復(fù)性溫度在4℃時，復(fù)性效果最優(yōu)；對復(fù)性緩沖液中鹽類(主要是精氨酸和尿素的選擇)研究，結(jié)果表明當(dāng)復(fù)性緩沖液中加入05M的精氨酸時，復(fù)性效果最優(yōu)；對復(fù)性緩沖液中尿素濃度研究，結(jié)果表明當(dāng)復(fù)性緩沖液中加入尿素濃度為2M時，復(fù)性效果最優(yōu)：對GsSG加入復(fù)性緩沖液的時