丙型肝炎病毒抗體的雙抗原夾心檢測方法的初步建立.pdf

1、丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus，HCV）感染而引起的丙型肝炎現(xiàn)已呈全球分布，將近1.8億人為丙型肝炎的感染者，約占世界人口的3％，我國的感染率約為3.2％。
　　目前采用的第三代間接ELISA檢測方法由于其在方法學(xué)上的固有缺陷，容易造成假陽性檢測結(jié)果和漏檢;發(fā)展雙抗原夾心ELISA法檢測試劑是試劑發(fā)展的方向，由于HCV抗原的分子量相對較小，用酶來對HCV抗原直接標(biāo)記時，極易造成空間位阻，使抗體與抗原的進(jìn)一步結(jié)合受到較

2、大的抑制，所以對HCV抗原的標(biāo)記是建立抗丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心ELISA檢測法的主要難點，也是目前國內(nèi)外該領(lǐng)域中研究的熱點。
　　本研究通過生物素親和素系統(tǒng)的放大效應(yīng)來減少抗原標(biāo)記時的空間位阻，建立抗HCV抗體的雙抗原夾心ELISA檢測方法。利用實驗室已經(jīng)構(gòu)建好的質(zhì)粒載體，表達(dá)并純化出夾心ELISA法所用的抗原，將抗原偶聯(lián)到活化的長臂生物素上，制各成長臂生物素化的丙肝抗原，作為夾心抗原，用辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親合素作為酶結(jié)合

3、物，利用辣根過氧化物酶催化底物進(jìn)行顯色，建立雙抗原夾心檢測法。
　　采用本研究建立的雙抗原夾心法與對照試劑平行檢測500份臨床標(biāo)本，對檢測結(jié)果不一致的樣品采用HCVRNA定量檢測試劑盒進(jìn)行確定驗證。結(jié)果顯示:檢測結(jié)果一致的樣品有493份，其中包括48份陽性樣品和445份陰性樣品，檢測結(jié)果不一致的樣品有7份，其中間接法陽性而夾心法陰性的有4份，HCVRNA檢測均為陰性;夾心法陽性而間接法陰性的有3份，HCVRNA檢測陽性的有2份。<