鴨病毒性肝炎卵黃抗體檢測方法的建立.pdf

1、鴨病毒性肝炎是危害我國養(yǎng)鴨業(yè)最嚴重的疾病之一，該病主要感染1月齡以下的雛鴨。預防和控制該病的主要手段是進行免疫接種。為了更方便快速地檢測種鴨的免疫水平，本研究建立了檢測Ⅰ型鴨病毒性肝炎卵黃抗體的乳膠凝集試驗方法和間接ELISA方法。主要完成了以下研究工作：
　　 第一，采用本實驗室提純DHV-Ⅰ的方法--差速超高速離心法，得到了試驗所用的抗原，病毒蛋白含量為8122μg/mL。
　　 第二，用本實驗室已克隆表達的DHV-

2、Ⅰ VP1重組蛋白作為抗原致敏聚苯乙烯乳膠，建立了檢測DHV-Ⅰ抗體的乳膠凝集試驗方法，確定VP1蛋白的最佳致敏量為200μg/mL，致敏溫度37℃，致敏時間2.5h。研究結果表明，致敏乳膠無自凝性，靈敏度達到74.3％，與鴨瘟、鴨疫里氏桿菌、鴨鏈球菌等無交叉反應。
　　 第三，通過試驗，確定了可快速簡便提取卵黃抗體的條件，即將卵黃做1：8-1：10倍稀釋，充分攪拌后4℃8000 r/min離心60 min即可用致敏乳膠來檢測。

3、該條件簡便易行，可在設備簡陋的基層應用。
　　 第四，用提純的DHV-Ⅰ作為包被抗原，建立了檢測DHV-Ⅰ卵黃抗體的間接ELISA方法。本方法最佳工作條件為：抗原包被濃度為1：400（5.38μg/mL），樣品稀釋濃度為1：256（9.68μg/mL），酶標二抗稀釋濃度為1：3200，陰陽性臨界OD值為0.203。
　　 第五，應用乳膠凝集試驗方法和間接ELISA方法，對850份血清和630份卵黃樣本進行檢測，結果表明：