雷公藤多苷對糖尿病大鼠腎臟巨噬細胞浸潤及NF-κB、MCP-1表達影響的研究.pdf

1、目的:
　　 本研究以高糖高脂飼養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)誘導的糖尿病大鼠為實驗對象，以雷公藤多苷(Tripterygium Wilfordii PolyglucosideTWP)為治療藥物，探討不同劑量雷公藤多苷對糖尿病腎病的預防及早期治療對減少糖尿病腎病大鼠蛋白尿的療效，雷公藤多苷對腎臟巨噬細胞浸潤及相關細胞因子NF-κB、MCP-1表達的影響及可能的作用機制。
　　 方法:

2、>　　 清潔級雄性SD大鼠136只，隨機選取16只分為預防正常對照組（PNC組）、治療正常對照組（TNC組），每組8只，飼以常規(guī)飼料;其余120只大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周聯(lián)合小劑量STZ(30mg/kg)尾靜脈注射建立T2DM模型，將成模大鼠隨機分為預防模型對照組（PDM組）、預防雷公藤多苷低劑量組(PTL組，6mg/kg)、預防雷公藤多苷中劑量組（PTM組，12mg/kg）、預防雷公藤多苷高劑量組（PTH組，24mg/kg）及治療

3、模型對照組（TDM組）、治療雷公藤多苷低劑量組（TTL組，6mg/kg）、治療雷公藤多苷中劑量組(TTM組，12mg/kg)、治療雷公藤多苷高劑量組（TTH組，24mg/kg），每組15只。預防組于DM成模后即開始灌胃，灌胃4周后處死;治療組于DM成模后第5周開始灌胃，第8周末處死;PNC、TNC組和PDM、TDM組以等量蒸餾水灌胃。觀察大鼠一般情況、血糖、腎重/體重、肝腎功能、血脂、血常規(guī)、24h尿蛋白的變化;光鏡、電鏡觀察腎臟病理及

4、超微結構的變化;通過RT-PCR和免疫組化法分別從基因水平和蛋白水平探討細胞因子NF-κB、MCP-1在腎臟的表達情況，并通過RT-PCR及免疫組化法觀察巨噬細胞表面標記蛋白CD68的表達情況，明確巨噬細胞及NF-κB、MCP-1在DN中的作用以及雷公藤多苷治療的影響和可能機制。
　　 結果:
　　 1.預防及治療組實驗大鼠，與對照組相比，糖尿病模型大鼠均表現(xiàn)為血糖升高、體重下降、腎重/體重的比重增加(P＜0.05)，雷

5、公藤多苷干預治療后血糖及體重較糖尿病模型組無明顯變化，腎重/體重較模型組均有所降低，其中雷公藤多苷給藥中劑量組降低最明顯。
　　 2.肝腎功能:預防組實驗大鼠中PTH組AST水平較PNC、PDM、PTL及PTM組明顯升高(P＜0.05)，各組間ALT、SCr、BUN水平比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，治療組實驗大鼠中AST、ALT、SCr、BUN水平比較均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。血常規(guī):預防組實驗大鼠中各組間WBC、RB

6、C、Hb、PLT、LYM、MONO及NEUT水平比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，治療組實驗大鼠中雷公藤多苷給藥后各組的LYM水平均較TNC組下降(P＜0.05)，WBC、RBC、Hb、PLT、MONO及NEUT水平比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。血脂:高糖高脂飼料喂養(yǎng)組大鼠造模前TG、TC水平明顯高于PNC、TNC組(P＜0.05)，預防及治療組雷公藤多苷給藥各組TG、TC均較模型對照組有所降低(P＜0.05)，三組間無統(tǒng)計學差異(

7、P＞0.05)。
　　 3.24小時尿蛋白結果
　　 與PNC、TNC組相比，PDM、TDM組大鼠UMA明顯升高(P＜0.05);與PDM組相比，雷公藤多苷預防組干預后UMA有不同程度降低，其中PTM組下降最明顯(P＜0.05)，PTL組次之(P＜0.05)，PTH組降低不明顯(P＞0.05);與TDM組相比，雷公藤多苷治療組給藥后UMA均明顯降低(P＜0.05)，以TTM組下降最明顯。
　　 4.光鏡
　

8、　 4.1預防組:PNC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質未見明顯異常。PDM組大鼠可見腎小球輕度萎縮，系膜細胞輕度增生，腎小球毛細血管基底膜增厚，腎小管上皮細胞空泡及顆粒變性等DN的腎臟病理改變，雷公藤多苷干預后各組上述病理性改變均有所改善，其中PTM組改善最明顯。
　　 4.2治療組:TNC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質未見明顯異常。TDM組大鼠可見腎小球萎縮，系膜區(qū)彌漫性增寬，腎小球毛細血管基底膜增厚，腎小管上皮細胞空泡及顆粒變

9、性、間質可見多量纖維組織灶性增生等DN的腎臟病理改變。雷公藤多苷給藥后各組上述病理性改變均有所改善，其中TTM組改善最明顯。
　　 5.電鏡
　　 5.1預防組:PNC組腎小球及腎小管均未見異常。PDM組腎小球基底膜增厚，足突融合，足細胞膜破裂;腎小管基底膜增厚斷裂，線粒體擴張、嵴斷裂。雷公藤多苷干預后，上述病理改變均較PDM組減輕，其中PTM組病理改變減輕最明顯。
　　 5.2治療組:TNC組腎小球及腎小管均未

10、見異常。TDM組大鼠腎小球基底膜明顯增厚，足突融合，足細胞細胞膜破裂;腎小管基底膜不規(guī)則增厚，線粒體嵴斷裂，結構模糊，細胞質內見大量吞飲泡(Pt)，細胞膜邊界不清。雷公藤多苷給藥后，上述病理改變均較TDM組減輕，其中TTM組病理改變減輕最明顯。
　　 6.免疫組化及RT-PCR: CD68、NF-κB、MCP-1在腎小球及腎小管中均有表達，CD68主要表達于腎小球區(qū)域，NF-κB及MCP-1主要表達于腎小管區(qū)域。
　　

11、6.1預防組:與PNC組相比，PDM組CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表達水平明顯升高(P＜0.05)。與PDM組相比，雷公藤多苷干預各組CD68、NF-κB、MCP-1表達水平下降(P＜0.05)，其中PTM組下降最明顯。
　　 6.2治療組:與TNC組相比，TDM組CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表達水平明顯升高（P＜0.05）。與TDM組相比，雷公藤多苷給藥各組CD68、NF-κB、MCP-1表達水平下

12、降(P＜0.05)，其中TTM組下降最明顯。
　　 結論:
　　 1.成功制備DN模型，血糖、血脂水平、24h尿蛋白特點及腎臟病理變化符合人類T2DM及DN的特點及病理變化。
　　 2.預防性給予雷公藤多苷藥物干預可有效延緩DN的發(fā)生發(fā)展，DN早期及時給予雷公藤多苷治療，可減少24h尿蛋白，有效延緩DN的進展。
　　 3.應用低、中劑量雷公藤多苷能夠預防和治療早期DN，具有較高安全性，雷公藤多苷高劑量（2