雷公藤多苷對糖尿病腎病大鼠腎臟TGF-β1及FN表達的影響.pdf

1、目的：2010年糖尿病患者人數(shù)達到2.85億，將近全世界成人數(shù)量的7％，糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病患者常見的慢性微血管并發(fā)癥，也是終末期腎衰竭的最主要原因。DN的發(fā)生是多種原因綜合作用的結(jié)果，近年來研究揭示DN的發(fā)病除了與代謝紊亂和血流動力學改變的影響有關(guān)外，炎癥機制是其持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵因素之一，其中炎性細胞因子轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforminggrowth factor-β，TGF-β

2、1)、纖維粘連蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)起重要作用。雷公藤多苷是我國傳統(tǒng)中草藥，具有免疫抑制作用，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種自身免疫性疾病的治療。其是否可以減少尿蛋白，改善腎臟損害，需要進一步研究證實。此外，觀察DN時腎臟組織TGF-β1和FN的表達情況，有助于我們對DN發(fā)病機制的理解，還有重要的治療意義。本研究主要通過建立2型DN模型大鼠，應(yīng)用雷公藤多苷(Tripterygiumwilfordii polyglucoside，T

3、WP)對該模型進行干預(yù)性治療，觀察實驗動物的24小時尿蛋白、血常規(guī)、肝功能、腎功能，光鏡、電鏡觀察腎臟病理形態(tài)學以及RT-PCR、免疫組織化學法分析腎組織中TGF-β1及FN等的變化，探討雷公藤多苷對DN大鼠腎臟預(yù)防治療作用的可能機制。
　　 方法：清潔級雄性SD大鼠136只，隨機選取16只分為預(yù)防正常對照組（PNC組）、治療正常對照組（TNC組），每組8只，飼以常規(guī)飼料;其余120只大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周聯(lián)合小劑量STZ（

4、30mg/kg）尾靜脈注射建立T2DM模型，將成模大鼠隨機分為預(yù)防模型對照組（PDM組）、預(yù)防雷公藤多苷低劑量組(PTL組，6mg/kg)、預(yù)防雷公藤多苷中劑量組（PTM組，12mg/kg）、預(yù)防雷公藤多苷高劑量組（PTH組，24mg/kg）及治療模型對照組（TDM組）、治療雷公藤多苷低劑量組（TTL組，6mg/kg）、治療雷公藤多苷中劑量組（TTM組，12mg/kg）、治療雷公藤多苷高劑量組（TTH組，24mg/kg），每組15只。雷

5、公藤多苷預(yù)防組于成模后即開始灌胃，灌胃4周后處死;雷公藤多苷治療組于成模后第5周開始灌胃，第8周末處死;PNC、TNC組和PDM、TDM組以等量蒸餾水灌胃。實驗過程中記錄大鼠體重(BW)、血糖、24小時尿微量白蛋白(UMA)變化，STZ注射前內(nèi)眥取血測血脂。實驗結(jié)束時:①留取血標本用于血常規(guī)、肝腎功能、血脂測定;記錄BW、腎臟重量(KW);②留取腎組織標本，光鏡、電鏡觀察腎臟病理及超微結(jié)構(gòu)的變化;RT-PCR法檢測TGF-β1和FN的表

6、達;免疫組化法檢測TGF-β1和FN的表達，明確TGF-β1和FN在DN中的作用以及雷公藤多苷治療的影響和可能機制。
　　 結(jié)果：⑴成功制備DN模型，24h尿蛋白特點及腎臟病理變化符合人類2型糖尿病腎病的特點及病理變化。⑵預(yù)防及治療組模型大鼠血糖均維持在16.7mmol/L以上;腎重/體重的比重均較正常對照組增加(P＜0.05);雷公藤多苷給藥后各組腎重/體重的比重較模型組均有所降低，其中雷公藤多苷給藥中劑量組下降最明顯。⑶預(yù)防

7、組成模第4周末時，各組的UMA水平均比正常對照明顯升高，雷公藤多苷給藥后各組UMA均有所下降，其中給藥中劑量組UMA水平下降最明顯(P＜0.05);治療組成模第4周末及第8周末時，各組的UMA水平均較成模時明顯升高（P＜0.05），成模第8周末時，模型對照組及雷公藤多苷給藥各組的UMA水平均比正常對照組明顯升高(P＜0.05)，雷公藤多苷給藥后各組UMA均有所下降（P＜0.05），其中PTM組UMA水平下降最明顯（P＜0.05）。⑷肝腎

8、功、血脂結(jié)果顯示:預(yù)防PTH組AST水平較其余各組明顯升高(P＜0.05);預(yù)防組各組間ALT、SCr及BUN水平比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;治療組各組間AST、ALT、SCr及BUN水平比較也無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。高脂飼料飼養(yǎng)4周后，模型組大鼠TG、TC水平與正常組大鼠比較明顯升高(P＜0.05)，預(yù)防組和治療組大鼠分別與正常對照組比較，模型對照組、雷公藤多苷給藥各組TG、TC均明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05

9、)。血常規(guī)結(jié)果顯示:雷公藤多苷治療給藥組淋巴細胞較TNC組明顯降低(P＜0.05)，雷公藤多苷預(yù)防組中淋巴細胞無明顯差異(P＞0.05)，其余白細胞、紅細胞、血小板、血紅蛋白、單核細胞和中性粒細胞在各組間均無明顯差異(P＞0.05)。⑸光鏡、電鏡結(jié)果顯示:預(yù)防組和治療組中正常對照組大鼠腎小球體積、腎小球系膜區(qū)、腎小囊，腎小管及腎間質(zhì)均未見明顯異常。預(yù)防組和治療組的模型對照組均可腎小球和腎小管DN的腎臟病理改變。雷公藤多苷給藥后各組上述病

10、理性改變均有所改善，其中雷公藤多苷給藥中劑量組均改善最明顯。⑹實時熒光定量PCR顯示，與正常對照組相比較，所有DM組TGF-β1、FNmRNA表達水平均顯著升高，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;雷公藤多苷干預(yù)和治療組的TGF-β1、FN mRNA表達水平與模型對照組比較均顯著下降，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);其中，中劑量組表達量下降最顯著，與其余各組比較均具有統(tǒng)計學差異。⑺免疫組化結(jié)果顯示，TGF-β1、FN在DM各組的腎小球及腎小

11、管中均有表達，且主要表達于腎小管區(qū)域。雷公藤多苷干預(yù)和治療組的TGF-β1、FNmRNA表達水平與模型對照組比較均顯著下降，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);其中，中劑量組表達量下降最顯著。
　　 結(jié)論：①成功制備DN模型，24h尿蛋白特點及腎臟病理變化符合人類2型糖尿病腎病的特點及病理變化。②雷公藤多苷給藥后，預(yù)防組和治療組UMA均有所下降，尤其是雷公藤多苷中劑量給藥組UMA水平下降最明顯，雷公藤多苷具有降低尿蛋白的作用，可有效