雷公藤多苷對糖尿病腎病大鼠巨噬細(xì)胞浸潤及相關(guān)炎癥因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Diabetes mellitus，DM)患者最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，也是終末期腎病(End stage renal disease，ESRD)的最主要原因。目前DN的病因尚未完全闡明，新近研究證實免疫炎癥損傷在DN發(fā)生發(fā)展過程中占有重要地位，巨噬細(xì)胞及其相關(guān)炎癥因子可通過致炎作用導(dǎo)致腎損害。雷公藤多苷作為一種免疫抑制劑，具有強(qiáng)大的抗炎、抗免疫作用。

2、本研究以鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）介導(dǎo)的2型糖尿病(Type2 diabetesmellitus，T2DM)和腎病大鼠模型為研究對象，探討雷公藤多苷對大鼠巨噬細(xì)胞及其白介素-12(Interleukin-12，IL-12)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子4(Signaltransducers and activators of transcription4，STAT4)、γ-干擾素（Gamma interferon，IF

3、N-γ）表達(dá)的影響及其可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 清潔級雄性SD大鼠136只，隨機(jī)選取16只分為預(yù)防正常對照組（PNC組）、治療正常對照組（TNC組），每組8只，飼以常規(guī)飼料;其余120只大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周聯(lián)合小劑量STZ（30mg/kg）尾靜脈注射建立T2DM模型，將成模大鼠隨機(jī)分為預(yù)防模型對照組（PDM組）、預(yù)防雷公藤多苷低劑量組(PTL組，6mg/kg)、預(yù)防雷公藤多苷中劑量組（PTM組，12mg/kg

4、）、預(yù)防雷公藤多苷高劑量組（PTH組，24mg/kg）;治療模型對照組（TDM組）、治療雷公藤多苷低劑量組（TTL組，6mg/kg）、治療雷公藤多苷中劑量組（TTM組，12mg/kg）、治療雷公藤多苷高劑量組（TTH組，24mg/kg），每組15只。雷公藤多苷預(yù)防組于成模后即開始灌胃，灌胃4周后處死;雷公藤多苷治療組于成模后第5周開始灌胃，第8周末處死;PNC、TNC組和PDM、TDM組以等量蒸餾水灌胃。實驗過程中記錄大鼠體重(BW)、

5、血糖、24小時尿微量白蛋白(UMA)變化，STZ注射前內(nèi)眥取血測血脂。實驗結(jié)束時:①留取血標(biāo)本用于肝腎功能、血脂、血常規(guī)測定以及ELISA法檢測IL-12、IFN-γ;記錄BW、腎臟重量(KW);②留取腎組織標(biāo)本，RT-PCR法檢測CD68、IL-12、STAT4、IFN-γ的表達(dá);WesternBlotting法檢測IL-12、STAT4、p-STAT4、IFN-γ的表達(dá);免疫組化法檢測CD68的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　

6、　 1.造模結(jié)果:高糖高脂喂養(yǎng)組大鼠在高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周后基礎(chǔ)血糖、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)較正常對照組明顯升高;STZ注射后，糖尿病模型組大鼠血糖明顯升高，出現(xiàn)多飲、多尿、多食、體重下降等癥狀，UMA自第4周起明顯高于正常對照組。
　　 2.一般指標(biāo):①體重、血糖:與PNC、TNC組相比，雷公藤多苷預(yù)防組和治療組血糖明顯升高(P＜0.05)，體重明顯下降(P＜0.05);②肝、腎功能:PTH組谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)較

7、PNC、PDM、雷公藤多苷預(yù)防給藥組明顯升高(P＜0.05);雷公藤多苷治療組中AST無明顯差異（P＞0.05）;其余谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)在各組間均無明顯差異(P＞0.05)。③血脂:PDM、TDM組大鼠TG、TC較PNC、TNC組明顯升高(P＜0.05);雷公藤多苷預(yù)防組和治療組給藥后TG、TC較PDM、TDM組明顯降低(P＜0.05);高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)在各組間無明顯差異(P＞0.0

8、5)。④血常規(guī):雷公藤多苷治療組中三個給藥組的淋巴細(xì)胞較TNC組明顯降低(P＜0.05);雷公藤多苷預(yù)防組中淋巴細(xì)胞無明顯差異(P＞0.05);其余白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、血紅蛋白、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在各組間均無明顯差異（P＞0.05）。
　　 3.UMA和腎重指數(shù)(KW/BW):與PNC、TNC組相比，PDM、TDM組大鼠UMA、KW/BW明顯升高(P＜0.05);與PDM組相比，雷公藤多苷預(yù)防組給藥后UMA、KW/BW有不

9、同程度降低，其中PTM組下降最明顯（P＜0.05），PTL組次之(P＜0.05)，PTH組降低不明顯(P＞0.05);與TDM組相比，雷公藤多苷治療組給藥后UMA、KW/BW均明顯降低(P＜0.05)，以TTM組下降最明顯。
　　 4.ELISA:與PNC、TNC組相比，PDM、TDM組血清IL-12、IFN-γ水平均明顯升高(P＜0.05);與PDM、TDM組相比，雷公藤多昔預(yù)防組和治療組給藥后IL-12、IFN-γ水平均明顯

10、降低(P＜0.05)，以PTM、TTM組下降最明顯。
　　 5.RT-PCR:與PNC、TNC組相比，PDM、TDM組大鼠腎臟CD68、IL-12、STAT4、IFN-γ mRNA水平均明顯升高(P＜0.05);與PDM、TDM組相比，雷公藤多苷預(yù)防組和治療組給藥后CD68、IL-12、STAT4、IFN-γ mRNA水平均明顯降低(P＜0.05)，以PTM、TTM組下降最明顯。
　　 6.Western Blottin

11、g:與PNC、TNC組相比,PDM、TDM組大鼠腎臟IL-12、p-STAT4/STAT4、IFN-γ蛋白水平均明顯升高(P＜0.05);與PDM、TDM組相比，雷公藤多苷預(yù)防組和治療組給藥后IL-12、p-STAT4/STAT4、IFN-γ蛋白水平均明顯降低(P＜0.05)，以PTM、TTM組下降最明顯。
　　 7.免疫組化:PNC、TNC組大鼠腎小球及腎小管可見少量表達(dá)的CD68;與PNC、TNC組相比，PDM、TDM組大鼠

12、腎小球系膜區(qū)及腎小管中CD68表達(dá)明顯增加(P＜0.05);雷公藤多苷預(yù)防組和治療組給藥后CD68表達(dá)較PDM、TDM組明顯下降(P＜0.05)，以PTM、TTM組下降最明顯。
　　 結(jié)論:
　　 1.成功制備T2DM和DN模型，高血糖、高血脂、24h尿蛋白特點(diǎn)符合人類T2DM和DN特征。
　　 2.DN大鼠腎臟CD68、IL-12、p-STAT4、IFN-γ以及血清中IL-12、IFN-γ的表達(dá)水平均較正常對照

13、組明顯增加，提示致炎作用參與了DN的發(fā)生發(fā)展。
　　 3.應(yīng)用低劑量(6mg/kg)、中劑量（12mg/kg）雷公藤多苷早期預(yù)防和治療DN，均可顯著降低蛋白尿，以中劑量效果最明顯。
　　 4.應(yīng)用不同劑量雷公藤多苷早期預(yù)防和治療DN，均可能通過抑制巨噬細(xì)胞浸潤以及下調(diào)IL-12、p-STAT4、IFN-γ的表達(dá)減輕炎癥損傷從而改善DN，以中劑量效果最明顯。
　　 5.低、中劑量雷公藤多苷具有較高的安全性，而高劑量