5-FC-CD∷UPRT聯(lián)合基因?qū)Υ笫竽X膠質(zhì)瘤治療作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討5-FC/CD：：UPRT聯(lián)合基因系統(tǒng)對大鼠顱內(nèi)腦膠質(zhì)瘤的治療作用。 方法：1.以逆轉(zhuǎn)錄病毒介導構(gòu)建C6-CD：：UPRT細胞系。 2.應用核磁共振質(zhì)譜法測定19F的磁共振磁譜(19F-NMR)變化，驗證CD：：UPRT聯(lián)合基因的表達產(chǎn)物能夠使5-FC向5-FU轉(zhuǎn)化。 3.應用立體定向技術(shù)移植C6-CD：：UPRT細胞至SD大鼠尾狀核，建立顱內(nèi)膠質(zhì)瘤荷瘤鼠模型，設(shè)立C6-pLXSN和C6細胞為對照組，應

2、用5-FC腹腔注射治療，觀察腫瘤大小、大鼠生存期、電鏡觀察細胞形態(tài)和流式細胞儀檢測腫瘤細胞的凋亡指標的變化。 結(jié)果：1.在成功構(gòu)建含CD：：UPRT基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的基礎(chǔ)上，轉(zhuǎn)染包裝細胞獲得重組逆轉(zhuǎn)錄病毒，感染大鼠膠質(zhì)瘤細胞C6后經(jīng)抗生素G418篩選獲得穩(wěn)定表達CD：：UPRT雙基因的細胞系C6-CD：：UPRT，經(jīng)PCR鑒定證實無誤。 2.核磁共振方法測定19F的磁共振磁譜(19F-NMR)變化，結(jié)果表明CD：：UP

3、RT基因能夠有效表達出酶產(chǎn)物，高效轉(zhuǎn)化5-FC為5-FU，發(fā)揮殺傷膠質(zhì)瘤細胞的作用。 3.各組大鼠接種腫瘤細胞后均有不同程度的進食減少、進攻性減弱、偏癱，最后瀕死前呈惡液質(zhì)。成瘤后用5-FC(500mg.kg-1.d-1)經(jīng)單療程治療(10天)后，治療組大鼠癥狀開始減輕，體重漸趨上升。治療組大鼠的生存時間明顯延長，均超過了80天，而對照組平均生存期僅為32天，兩組對照有明顯差異(p＜0.01)。治療組經(jīng)5-FC治療后其腫瘤組織進

4、行流式細胞儀的檢測出現(xiàn)明顯的凋亡峰，其細胞凋亡率達到了19.36﹪，與對照組相比有顯著差異(p＜0.05)，提示5-FC殺傷C6-CD：UPRT細胞可能有凋亡機制的參與。電鏡觀察進一步發(fā)現(xiàn)治療組腫瘤細胞經(jīng)5-FC作用后出現(xiàn)明顯的凋亡小體等，更證明了5-FC/CD：：UPRT聯(lián)合基因治療的機理與促進細胞凋亡有關(guān)。 結(jié)論：CD：：UPRT聯(lián)合基因表達產(chǎn)物能夠高效轉(zhuǎn)化5-FC為5-FU；CD：：UPRT聯(lián)合基因聯(lián)合5-FC治療可對大鼠