miR-21基因治療聯(lián)合化療抑制腦膠質(zhì)瘤的時(shí)序效應(yīng)研究.pdf

1、化療耐受是惡性腦膠質(zhì)瘤化療效果不理想的重要原因之一，本文基于miR-21抑制劑對(duì)化療耐藥相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制，以PAMAM樹形大分子為基因載體，分別研究了miR-21基因治療對(duì)替莫唑胺、鹽酸阿霉素和紫杉醇化療的增敏效果，并研究了時(shí)序性聯(lián)合用藥對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞抑制效果的影響。原位雜交結(jié)果表明PAMAM樹形大分子可有效介導(dǎo)miR-21抑制劑在膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)染，顯著敲低腫瘤細(xì)胞內(nèi)miR-21的表達(dá)。MTT測(cè)試分析證明miR-21抑制劑與化療藥

2、物聯(lián)用后分別使替莫唑胺、鹽酸阿霉素和紫杉醇三種藥物的IC50值降低2到3倍。以Q值衡量miR-21抑制劑與三種化療藥物不同用藥時(shí)序時(shí)對(duì)LN229和U251細(xì)胞的抑制效果，發(fā)現(xiàn)對(duì)前者同時(shí)用藥時(shí)miR-21抑制劑和化療藥物表現(xiàn)出最強(qiáng)的協(xié)同作用，而對(duì)后者同時(shí)用藥時(shí)則表現(xiàn)為弱的加和作用，當(dāng)miR-21抑制劑和化療藥物間隔4小時(shí)用藥時(shí)表現(xiàn)出協(xié)同作用。
　　 為研究miR-21抑制劑和化療藥物聯(lián)合用藥時(shí)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的時(shí)效機(jī)制，選擇LN22

3、9(PTEN野生型)、U251(PTEN突變型)和U87(PTEN缺失型)三種不同遺傳背景的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，分析了miR-21抑制劑和替莫唑胺聯(lián)用時(shí)細(xì)胞耐藥相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化及與抑瘤效果的關(guān)系。原位雜交和熒光定量PCR結(jié)果分析證明聯(lián)合用藥時(shí)三種細(xì)胞系的增殖與其miR-21的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，流式細(xì)胞分析和Western Blot檢測(cè)表明聯(lián)合用藥誘導(dǎo)的促凋亡的能力依賴STAT3的狀態(tài)，即無論哪種細(xì)胞系，當(dāng)STAT3被miR-21抑制劑或替莫