基質金屬蛋白酶-2的基礎與臨床研究.pdf

1、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)是由HuhtalaP.等人在1990年克隆表達的，其結構中含有信號肽、前肽、催化區(qū)、纖維連接蛋白樣區(qū)域及血紅素結合樣區(qū)域。人類MMP-2基因編碼分子量約72kd的酶原，經活化后水解為65kd的活性形式。MMP-2是降解細胞外基質骨架蛋白Ⅳ型膠原主要酶之一。研究發(fā)現MMP-2與腫瘤的侵襲和轉移、自身性疾病自身免疫性疾病、牙周疾病以及腫瘤組織的血管生成密切相關。鑒于MMP-2的重要病理生理功能，本研究旨在基礎

2、和臨床兩方面對MMP-2的功能作進一步探討。通過在體外表達MMP-2所特有的結構域，我們制備出抗MMP-2的特異性單克隆抗體，利用所制備的單克隆抗體初步建立了檢測血清/漿MMP-2水平的試劑盒，并且對正常人及良惡性腫瘤病人血清MMP-2水平進行了測定和比較，這為檢測MMP-2提供了一個有效的工具；運用RNA干擾(RNAi)技術對MMP-2基因進行基因沉默，更進一步揭示了MMP-2的功能及可能的作用機制；同時對基質金屬蛋白酶在慢性粒細胞性

3、白血病，這一特殊類型的腫瘤中的作用進行了初步探討。1.MMP-2單克隆抗體制備及功能研究　　根據GenBank中MMP-2cDNA序列設計引物，體外培養(yǎng)EAhy926內皮細胞，收集細胞后抽提總RNA，利用所合成引物經RT-PCR獲得纖維連接蛋白樣片段cDNA，與pET20b(+)表達載體重組后轉化大腸桿菌BL21(DE3)plus，挑選陽性克隆后，經IPTG誘導表達蛋白。蛋白經次氮基三乙酸鎳瓊脂糖(Ni-NTAagarose)柱純化濃