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文檔簡介
1、雞傳染性喉氣管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由雞傳染性喉氣管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV)引起的急性呼吸道疾病。該病具有急性爆發(fā)和潛伏感染的特點,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。由于ILTV弱毒疫苗能引起潛伏感染,并且在雞群中的傳播會造成毒力返強,從而成為新的感染來源;因此,迫切需要研制安全、高效的新型ILT疫苗。本研究以馬立克氏病毒(MDV
2、) CVI988/Rispens疫苗毒株為載體,構建表達ILTV保護性抗原gB糖蛋白的重組病毒,并分別評價重組病毒對ILT和馬立克氏病的免疫效果。
本研究以CVI988/Rispens疫苗毒株基因組短獨特區(qū)的sorf1和sorf2作為ILTV gB基因插入位點,以網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒(REV)的長末端重復序列(LTR)為啟動子、綠色熒光蛋白(EGFP)基因為報告基因,構建轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒pMDV-gB-GFP。用磷酸鈣共沉淀法將pM
3、DV-gB-GFP和CVI988/Rispens基因組DNA共轉(zhuǎn)染雞胚成纖維(CEF)細胞,獲得帶有EGFP標志的重組病毒;經(jīng)有限稀釋法純化、篩選,獲得帶有EGFP標志的重組病毒rMDV-gB-GFP。用Cre重組酶去除rMDV-gB-GFP的EGFP基因,得到重組病毒rMDV-gB。經(jīng)PCR、間接免疫熒光試驗(IFA)和Western-blot試驗鑒定,證明重組病毒rMDV-gB基因組中插入了ILTV gB基因,并能表達ILTV gB
4、糖蛋白。
本研究評價了rMDV-gB對ILTV強毒株攻擊的免疫保護效果。將90只1日齡SPF雞隨機分成4組:rMDV-gB免疫組、rMDV-gB與ILTV弱毒疫苗聯(lián)合免疫組、ILTV弱毒疫苗免疫組、攻毒對照組。前兩組的試驗雞1日齡時分別頸部皮下接種5000空斑形成單位(PFU)的rMDV-gB;第二組和第三組的試驗雞于21日齡時接種1羽份的ILTV弱毒疫苗;42日齡時,各組試驗雞均用105 EID50/雞的ILTV強毒株攻擊。
5、觀察試驗雞的癥狀表現(xiàn),并于攻毒后第10天進行剖檢和病理組織學檢查。結果顯示,在ILTV強毒株攻擊后,rMDV-gB免疫組的保護率為65%,而ILTV弱毒疫苗組的保護率為41%,rMDV-gB的保護效力明顯高于ILTV弱毒疫苗。本研究還發(fā)現(xiàn),在1日齡雛雞接種rMDV-gB后,再于21日齡接種ILTV弱毒疫苗,并不能提高對ILTV強毒株攻擊的保護作用;表明1日齡雛雞接種rMDV-gB后就能建立起針對ILTV的有效免疫力。
本研究還
6、評價了rMDV-gB對MDV RB1B超強毒株攻擊的免疫保護效果。將60只1日齡SPF雞隨機分為3個試驗組:rMDV-gB免疫組、CVI988/Rispens免疫組、攻毒對照組,每組20只試驗雞;rMDV-gB免疫組和CVI988/Rispens免疫組的試驗雞分別于1日齡時頸皮下接種5000 PFU/雞的相應疫苗;7日齡時,所有試驗雞經(jīng)腹腔接種500 PFU/雞的MDV RB1B超強毒株。連續(xù)觀察90天,記錄各試驗組雞的發(fā)病和死亡情況。
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