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文檔簡介
1、目的：探討代謝記憶效應(yīng)對(duì)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷的作用.
方法：原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為4組：1正常對(duì)照組，使用含5.5mM D-glucose M199培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。2持續(xù)高糖組，使用含30mM D-glucose M199培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。3短暫高糖組，使用含30mM D-glucose M199培養(yǎng)基培養(yǎng)1天后改為5.5mM D-glucose M199培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。4滲透壓對(duì)照組：使用含5.5mM D-glu
2、cose,24.5mM D-mannitol M199培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞功能相關(guān)指標(biāo)：使用MTT法評(píng)估內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力，使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡水平，使用DCFH-DA作為熒光探針流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧族（ROS）水平，使用黃嘌呤氧化法評(píng)估SOD水平，使用硫代巴比妥酸法評(píng)估MDA水平，使用酸還原酶法評(píng)估內(nèi)皮細(xì)胞上清液中NO水平，使用Real-time PCR技術(shù)測(cè)定eNOS mRNA表達(dá)水平，使用western bl
3、ot技術(shù)測(cè)定eNos蛋白水平。
結(jié)果：高糖組及短暫高糖組人原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖受到抑制，甘露醇對(duì)照組亦受到抑制，高糖使細(xì)胞凋亡增加，ROS，MDA水平升高，SOD水平下降，恢復(fù)正糖培養(yǎng)后，仍然不能恢復(fù)，而甘露醇對(duì)照組與正常對(duì)照組相比無差異，高糖組及短暫高糖組eNOS及一氧化氮水平呈先升高后下降趨勢(shì)，培養(yǎng)7天后，低于正常對(duì)照組，而高滲對(duì)照組與正常對(duì)照組相比無差異。
結(jié)論：短暫高血糖抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，增加內(nèi)皮細(xì)
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