碘促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究碘(iodine)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cells，VEC)增殖可能的分子機(jī)制。
　　方法：人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株EA.hy926常規(guī)培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，在37℃、5％CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　第一部分絲裂原活化蛋白激酶激酶1(Mitogen-activated Protein Kinase Kinase1，MEK1)抑制劑PD98059對(duì)碘離子

2、(Iodine ion，I-)濃度為300μg/L環(huán)境中的VEC增殖影響
　　實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、PD98059組、PD98059+KI組、KI組，應(yīng)用CCK-8試劑測(cè)定細(xì)胞增殖情況。
　　第二部分不同濃度I-對(duì)EA.hy926細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的影響
　　1.免疫印跡法測(cè)定不同濃度I-刺激后EA.hy926細(xì)胞的VEGF表達(dá)水平；

3、2.半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)測(cè)定不同濃度I-刺激后EA.hy926細(xì)胞VEGF mRNA的表達(dá)變化；3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：第一部分MEK1抑制劑PD98059對(duì)300μg/L I-環(huán)境中培養(yǎng)的VEC增殖的影響與正常對(duì)照組相比，I-組VEC的增殖率顯著增高(P<0.01)，提示300μg/L的I-能夠刺激VEC增殖；MEK1抑制劑組細(xì)胞增殖率顯著降低(P<0.01)，提示通過(guò)抑制MEK1激活能夠抑制VEC增殖

4、。MEK1抑制劑+KI組與KI組相比細(xì)胞增殖率顯著降低(P<0.01)，提示在300μg/L I-環(huán)境中抑制MEK1能夠抑制VEC增殖。MEK1抑制劑+KI組與MEK1抑制劑組細(xì)胞增殖率無(wú)明顯差異(p>0.05)。這些結(jié)果表明：300μg/L I-能夠刺激VEC增殖，在含I-環(huán)境下抑制MEK能夠抑制VEC增殖。第二部分不同濃度I-刺激對(duì)VEC表達(dá)VEGF的影響1.免疫印跡檢測(cè)結(jié)果顯示不同濃度I-刺激EA.hy926細(xì)胞24h后，與正常對(duì)

5、照紺比較，實(shí)驗(yàn)組VEGF蛋白表達(dá)無(wú)上調(diào)(P>0.05)，各實(shí)驗(yàn)組間VEGF蛋白表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)2.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示不同濃度I-刺激EA.hy926細(xì)胞24h后，與正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組VEGFmRNA表達(dá)無(wú)上調(diào)(P>0.05)，各實(shí)驗(yàn)組間VEGFmRNA表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：300μg/L的I-能夠促進(jìn)VEC增殖；MEK1抑制劑能夠抑制I-對(duì)VEC增殖的促進(jìn)作用；I-促進(jìn)VEC增殖與ERK信號(hào)通