甘肅棘豆生物堿部位體內(nèi)外抗腫瘤活性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：(1)研究甘肅棘豆生物堿部位對S180荷瘤小鼠的抗腫瘤作用及免疫功能的影響。 (2)探討甘肅棘豆生物堿部位對人胃癌細(xì)胞株BGC-823增殖、細(xì)胞周期、凋亡、細(xì)胞形態(tài)、粘附、侵襲和遷移能力的影響。 方法：(1)健康昆明種小鼠隨機(jī)分為兩組，即甘肅棘豆生物堿部位組和空白對照組，每組10只。小鼠禁水12h后給予3000 mg·㎏-1，最大容積40 mL·㎏-1一次性灌胃給藥，對照組給予等體積的生理鹽水。兩周后將小鼠處死，解

2、剖并觀察主要臟器的變化。 (2)將接種S180腫瘤細(xì)胞株后的小鼠隨機(jī)分為5組，灌胃給藥10d，停藥后24h處死動物，稱體重，剝除腫瘤稱瘤重，同時解剖小鼠，稱脾重、胸腺重，計(jì)算脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，用MTT法測定脾細(xì)胞增殖率。 (3)甘肅棘豆生物堿部位不同劑量作用人胃癌細(xì)胞株BGC-823后，采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、倒置顯微鏡、粘附抑制實(shí)驗(yàn)及Boyden小室法檢測藥物對該腫瘤細(xì)胞增殖、形態(tài)、粘附、侵襲和遷移能力的影響。

3、 結(jié)果：(1)急性毒性實(shí)驗(yàn)：大劑量口服甘肅棘豆生物堿部位的正常小鼠解剖后，肉眼觀察其重要臟器無異常變化，體重及心、肝、肺、腎等臟器的重量與對照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。進(jìn)一步對兩組小鼠的臟器進(jìn)行常規(guī)HE染色，未發(fā)現(xiàn)明顯異常。 (2)甘肅棘豆生物堿部位高、中、低3個劑量組對S180荷瘤小鼠的腫瘤抑制作用與陰性對照組相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以中劑量組(32 mg·㎏-1)效果最好。與5-FU組相比，生物堿

4、部位各組對腫瘤的抑制作用稍弱。 (3)甘肅棘豆生物堿部位3個劑量組均能使小鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)及脾細(xì)胞增殖率增高，與陰性對照組和5-FU組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且以低劑量組作用明顯。24h、48h、72h脾細(xì)胞增殖率比較，以24h增殖率最高。 (4)MTT檢測結(jié)果顯示不同濃度、不同作用時間的甘肅棘豆生物堿部位對BGC-823細(xì)胞株的生長有著不同程度的抑制，以最高劑量200μg·mL-1作用效果最好，隨著劑量的

5、減低，藥物對細(xì)胞的抑制作用逐漸減弱。 (5)流式細(xì)胞術(shù)觀察不同劑量的甘肅棘豆生物堿部位對BGC-823細(xì)胞周期的影響，顯示該藥對細(xì)胞周期的影響呈劑量依賴性，將BGC-823細(xì)胞主要阻滯在G0/G1期，與對照組和5-FU組相比，均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，其中以200μg·mL-1組對細(xì)胞周期的阻滯作用最強(qiáng)。藥物對BGC-823細(xì)胞凋亡的作用檢測，未發(fā)現(xiàn)明顯的凋亡峰出現(xiàn)。 (6)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察不同劑量的甘肅棘豆生

6、物堿部位對細(xì)胞生長具有明顯的抑制作用，使細(xì)胞形態(tài)改變，部分貼壁細(xì)胞收縮變圓、漂??；細(xì)胞數(shù)目明顯減少，與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。 (7)粘附抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示甘肅棘豆生物堿部位不同劑量的處理組中，以高劑量組對細(xì)胞與膠原的粘附抑制作用最強(qiáng)，各組與對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；高劑量組與5-FU組相比，在不同時間段差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (8)Boyd

7、en小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示甘肅棘豆生物堿部位高劑量組侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)為71.67±9.29，與對照組和5-FU組相比較，差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；生物堿部位高劑量組與低劑量組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中劑量組和低劑量組分別與對照組和5-FU組比較，侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 (9)Boyden小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示甘肅棘豆生物堿部位高劑量組遷移穿膜細(xì)胞數(shù)為78.0±8.19，與對

8、照組相比較，差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，與5-FU組相比較，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；生物堿部位中劑量組與對照組和5-FU組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；生物堿部位低劑量組與對照組和5-FU組相比較，遷移穿膜細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：(1)甘肅棘豆生物堿部位大劑量用藥對正常小鼠無明顯的毒副作用。 (2)甘肅棘豆生物堿部位對S180荷瘤小鼠的腫瘤有一定抑制作用。

9、 (3)甘肅棘豆生物堿部位可以增強(qiáng)S180荷瘤小鼠的免疫功能。 (4)甘肅棘豆生物堿部位在體外對BGC-823胃癌細(xì)胞株的抑制作用呈現(xiàn)一定劑量和時間依賴性，并且可以影響腫瘤細(xì)胞的形態(tài)變化。 (5)甘肅棘豆生物堿部位可以影響B(tài)GC-823細(xì)胞周期，藥物作用后將細(xì)胞阻滯在G0/G1期，S期細(xì)胞數(shù)減少，從而影響細(xì)胞的DNA合成，進(jìn)而對細(xì)胞增殖起到抑制作用。 (6)甘肅棘豆生物堿部位可以抑制BGC-823胃癌細(xì)胞株與