新型黃芩苷(BA)衍生物(BAD和BAL)的制備及其體內外抗腫瘤活性評價.pdf

1、目的：
　　黃芩苷（Baicalin, BA）為中藥黃芩的主要成分之一，具有清熱解毒、抗氧化、抗炎、抗腫瘤等廣泛藥理作用。但其水溶性差、口服難吸收，生物利用度低等不足限制了其臨床應用。對此，我們用“綠色合成方法”制備了BA衍生物BAD和BAL，并進行體內外抗腫瘤作用評價。
　　方法：
　　1.采用“綠色化學”思路合成BAD和BAL，并通過紫外分光光度法（UV）、高效液相色譜法（HPLC）、薄層色譜（TLC）、核磁共振譜

2、（NMR）及質譜（MS）對其結構進行表征。
　　2.紫外分光光度法測定BA、BAD和BAL分別在1640培養(yǎng)基、含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基以及pH7.2的PBS水溶液中的水解穩(wěn)定性。
　　3. MTT法檢測BA、BAD和BAL分別對三株肺癌細胞（A549、H460、Calu-1），三株肝癌細胞（BEL-7402、SMMC7721、HepG2）以及三株乳腺癌細胞（MDA-MB-435、MCF-7、T74D）作用24 h和

3、48 h的增殖抑制活性。
　　4.流式細胞儀檢測BA、BAD和BAL對A549肺癌細胞的凋亡作用。
　　5．構建人肺癌細胞株A549裸鼠皮下移植瘤模型，通過測定腫瘤生長情況，動物體重變化，抑瘤率以及HE染色觀察藥物對腫瘤的影響，考察BA、BAD和BAL抗腫瘤作用。
　　結果：
　　1.首次成功合成BA的衍生物BAD和BAL，其UV最大吸收波長分別278.4 nm（BA）、282.4 nm（BAD）和282.6 n

4、m（BAL）， HPLC歸一化含量大于95%，TLC的Rf為0.45，ESI-MS m/z確證分子量為608，1H NMR確證的結果：(400 MHz, DMSO)δ8.08(s,1H),7.98(s,1H),7.83(t, J=13.7 Hz,1H),7.54(s,1H),7.38(d, J=17.5 Hz,1H),7.12(d, J=6.4 Hz,1H),6.97(d, J=8.4 Hz,1H),6.88(d, J=6.6 Hz,1

5、H),3.87(d, J=12.9 Hz,2H),3.80(s,4H),3.64(s,2H),2.15(s,3H)。
　　2. BA、BAD和BAL分別在三種介質中作用24 h的未降解百分率依次為84.73-92.75%、84.63-91.12%和85.59-92.70%。
　　3. BA、BAD和BAL分別對肺癌細胞A549、H460、Calu-1作用24 h的 IC-50（μg/ml）為：BA：80.31±3.47、10

6、9.10±4.21、46.59±3.10， BAD：28.04±1.43、37.19±0.88、37.83±2.94，BAL：34.71±1.78、49.57±2.49、31.93±2.91；48 h的 IC-50（μg/ml）為：BA：63.55±2.51、51.96±1.46、26.37±0.75，BAD：37.30±1.49、55.20±1.69、37.61±1.09， BAL：27.96±1.68、38.86±1.57、26.1

7、3±1.32。對肝癌細胞SMMC7721、BEL-7402、HepG2作用24 h的 IC-50（μg/ml）為：BA：56.93±3.67、87.62±4.13、52.18±2.72，BAD：41.25±2.83、-、-，BAL：33.50±2.07、39.89±3.12、-；48 h的 IC-50（μg/ml）為：BA：40.71±1.09、53.68±2.19、-，BAD：32.28±1.02、44.45±1.53、-，BAL：3

8、3.50±2.07、39.89±3.12、-。對乳腺癌細胞MDA-MB-435、T74D、MCF-7作用24 h的 IC-50（μg/ml）為：BA：50.00±3.33、66.14±2.07、62.96±3.13，BAD：124.38±4.96、28.89±1.73、47.34±3.47，BAL：83.53±4.14、25.10±1.07、43.58±3.56；48 h的 IC-50（μg/ml）為：BA：18.61±0.56、29.

9、08±0.72、28.60±0.75，BAD：83.25±1.91、24.33±0.53、39.54±1.31， BAL：-、21.93±0.55、32.90±0.77。
　　4.不同藥物濃度的BA（25、50、75μg/ml）對肺癌細胞A549的早期凋亡百分率（%）分別為：6.46、11.28、12.87；不同藥物濃度的BAD（10、25、50μg/ml）對肺癌細胞A549的早期凋亡百分率（%）分別為5.93、9.49、14.3

10、9；不同藥物濃度的BAL（10、25、50μg/ml）對肺癌細胞A549的早期凋亡百分率（%）分別為11.92、13.99、34.53。
　　5.與BA（抑瘤率：15.54%）比較，BAD和BAL均能抑制肺癌細胞A549裸鼠皮下瘤的生長，其抑瘤率為44.68%和65.27%。另外，各給藥組之間裸鼠體重未見顯著性差異，腫瘤塊HE染色結果提示給藥組的腫瘤細胞雖未見明顯的形態(tài)學改變，但其微血管豐富程度依次為：空白組≥BA組＞BAD組＞B

11、AL組。
　　結論：
　　1.本論文合成的BA衍生物BAD和BAL，結構新穎，國內外未見文獻報道，擬申請發(fā)明專利。
　　2.與BA比較，BAD和BAL在三種介質中均比較穩(wěn)定，未見顯著性差異（P>0.05）。
　　3.與BA比較，衍生物BAD和BAL對多種腫瘤細胞具有良好的增殖抑制活性，對肺癌細胞A549、Calu-1，肝癌細胞SMMC-7721、BEL-7402，乳腺癌細胞T74D均較為敏感。
　　4. B