HMGB1在老齡大鼠術(shù)后認知受損中的作用及機制研究.pdf

1、目的:1.探討麻醉和手術(shù)對老齡大鼠認知功能的影響。
　　2.初步探討晚期炎癥因子HMGB1在老齡大鼠發(fā)生術(shù)后認知受損中的作用。
　　方法:第一部分:①.22-23月齡雌性老齡SD大鼠隨機分為對照組(n=15)、麻醉組（A1、A3、A7麻醉后第1、3、7天，n=15/組）和手術(shù)組（S1、S3、S7手術(shù)后1、3、7天，n=15/組）。麻醉組大鼠3％異氟烷誘導后氣管插管，2％異氟烷維持2小時，麻醉過程監(jiān)測大鼠生命體征及氣體濃度。手

2、術(shù)組與麻醉組相同的麻醉條件下行脾臟切除手術(shù)，對照組單純吸入空氧混合氣體2小時.②.造模前Morris水迷宮定向航行試驗訓練6天，第7天造模，造模后1、3、7天Morris水迷宮記憶測試試驗測試大鼠空間學習記憶能力，smart junior軟件跟蹤記錄大鼠游泳的距離、潛伏期及速度。
　　第二部分:各項指標檢測每組隨機5個樣本，①.行為學測試后取血，提取血清，ELISA檢測血清中HMGB1、TNF-α、IL-1β的表達。②.灌注后取腦

3、組織IgG免疫組化法檢測海馬區(qū)血腦屏障通透性，熒光染色法檢測海馬區(qū)HMGB1表達，尼氏染色觀察海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)目。③.取海馬組織透射電鏡法檢測血腦屏障微觀結(jié)構(gòu)。④.取雙側(cè)海馬組織液氮凍存，凍存的右側(cè)海馬組織RT-PCR檢測HMGB1、TNF-α、IL-1β及受體RAGE的mRNA表達。⑤.凍存的左側(cè)海馬組織進行western blot檢測HMGB1、TNF-α、IL-1β及受體RAGE的蛋白表達。SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。

4、
　　結(jié)果:第一部分:手術(shù)創(chuàng)傷導致大鼠認知受損，在手術(shù)后1、3天游泳距離（1天732.97±157.38cm，3天613.17±175.63cm，P＜0.001）及潛伏期（1天44.54±6.63s，3天38.3±6.25s，P＜0.001）與對照組（距離:322.36±116.88cm，潛伏期:24.7±8.63s）相比延長，在單獨麻醉后1天上述指標也具有統(tǒng)計學意義（距離557.93±187.42sP=0.003，潛伏期35.9

5、9±7.70s P=0.001）。
　　第二部分:①.手術(shù)創(chuàng)傷導致外周血中HMGB1在手術(shù)后1天表達上調(diào)(0.204±0.023ug/L，P=0.003)，術(shù)后3天及7天組無統(tǒng)計學差異，TNF-α、IL-1β在各組之間無顯著差異。②.免疫組化結(jié)果顯示術(shù)后1天血腦屏障通透性增加，電鏡結(jié)果顯示術(shù)后1天血腦屏障的微觀結(jié)構(gòu)受損，而麻醉組損傷相對較輕。③.手術(shù)創(chuàng)傷導致海馬組織中HMGB1、TNF-α、IL-1β及受體RAGE在術(shù)后1天及3天

6、表達上調(diào)(P＜0.001)，上述指標麻醉后1天也具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。④.手術(shù)創(chuàng)傷未導致海馬CA1區(qū)神經(jīng)元丟失，與對照組相比無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論:第一部分:①.麻醉、手術(shù)引起老齡大鼠術(shù)后認知功能短期且可逆性受損。②.手術(shù)創(chuàng)傷引起老齡大鼠認知功能受損程度相對麻醉而言更為嚴重，且持續(xù)時間更長。
　　第二部分:①手術(shù)創(chuàng)傷誘導老齡大鼠外周血HMGB1表達上調(diào)與POCD密切相關(guān)。②.外周血HMGB1增加可能是引起海馬區(qū)