HIF-1α在人肺腺癌細(xì)胞株A549中對survivin的表達(dá)調(diào)控.pdf

1、目的：探討缺氧誘導(dǎo)因子（hypoxia-inducible factor-1α， HIF-1α）在人非小細(xì)胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）中對survivin啟動子轉(zhuǎn)錄活性影響。
　　方法：(1)免疫組化法觀察60例非小細(xì)胞肺癌患者和20例良性肺疾病患者組織中 Survivin和 HIF-1α蛋白表達(dá)情況，分析兩者的相關(guān)性。(2)采用熒光定量RT-PCR觀測人肺腺癌細(xì)胞株 A549細(xì)胞和正

2、常人胚肺泡上皮細(xì)胞 WI-38中survivin和HIF-1αmRNA表達(dá)水平。(3)基因定點(diǎn)突變survivin核心啟動子轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-19~-16bp處潛在HIF-1α結(jié)合位點(diǎn)，構(gòu)建含有survivin核心啟動子的熒光報(bào)告載體，通過測定螢光素酶的表達(dá)活性，觀察survivin核心啟動子片段及其突變體在A549細(xì)胞和WI-38細(xì)胞的表達(dá)活性，并比較其在A549細(xì)胞中表達(dá)的活性差異。
　　結(jié)果：(1)肺癌組織中survivin

3、的陽性率為81.60％(49/60)，明顯高于良性肺疾病組織5%(1/20)(p<0.05)； HIF-lα蛋白在肺癌中的陽性率為58.33%(35/60)，高于良性肺疾病10.0%(2/20)(p<0.05)。Survivin與HIF-lα蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。(2)在2×106個(gè) A549細(xì)胞內(nèi) survivin mRNA表達(dá)量為7.0450±0.1626ng，明顯高于其在相同數(shù)量WI-38細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量0.841

4、2±0.1128ng(p<0.05)；HIF-1α mRNA在 A549細(xì)胞中表達(dá)量為1.5714±0.1660ng，高于其在WI-38的表達(dá)量0.4872±0.0448ng(p<0.05)。(3)含有survivin核心啟動子230bp及其突變體的螢光報(bào)告載體在A549細(xì)胞中均有活性，均比含有啟動子和增強(qiáng)子的陽性對照 pGL3-control活性高，兩者與陰性對照(pGL3-basic)之間的差異均有顯著性(p<0.05)。在A549

5、細(xì)胞中，pGL3-SVP230-luc在2A549細(xì)胞中的相對活性為155.85，pGL3-SVP229-luc的相對活性為98.81，比突變前下降36.60%，兩者之間相對活性的差異有顯著性(p<0.05)；在WI-38細(xì)胞中，突變前survivin啟動子相對活性是49.41，而突變后是47.86，兩者之間的差異無顯著性(p>0.05)。survivin啟動子突變前后兩者相對活性均高于陰性對照(pGL3-basic)，survivin

6、啟動子在WI-38細(xì)胞中亦有活性。survivin啟動子在A549細(xì)胞中的活性高于其在 WI-38細(xì)胞中的活性，兩者之間的差異有顯著特異性(p<0.05)。
　　結(jié)論：1非小細(xì)胞肺癌組織中有Survivin蛋白和HIF-1α蛋白高表達(dá)且二者表達(dá)呈正相關(guān)。2 A549細(xì)胞內(nèi) HIF-1α和 survivin mRNA均有高表達(dá)。3 survivin啟動子上潛在HIF-1α結(jié)合位點(diǎn)對survivin啟動子活性具有上調(diào)作用。4 HIF-