全反式維甲酸對人肺腺癌A549細胞株增殖及環(huán)氧化酶-2表達的影響.pdf

1、目的：通過體外研究維甲類化合物的衍生物--全反式維甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）對人肺腺癌A549細胞株的作用，探討ATRA對人肺腺癌A549細胞株增殖及環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）表達的影響及其可能的機制。方法：（1）培養(yǎng)肺腺癌A549細胞：將肺腺癌A549細胞株接種在25ml培養(yǎng)瓶內，以含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，在5％CO2、37℃孵箱進行培養(yǎng)。（2）

2、取對數(shù)生長期培養(yǎng)的肺腺癌A549細胞用于實驗，按ATRA作用細胞的時間分為24小時，48小時和72小時三個時間段，每個時間段再按藥物濃度分為1×10-7mol/L（第2組），1×10-6mol/L（第3組），1×10-5mol/L（第4組），1×10-4mol/L（第5組）四組藥物濃度組和不加藥的對照組（第1組）共5組，每組10個實驗孔。待各實驗濃度的藥物作用細胞于各實驗時間段后，用四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）進行測定，分別檢測各實驗組

3、和對照組細胞的吸光度值，計算在各時間段各實驗濃度藥物對細胞的生長抑制率。（3）選擇最佳的藥物作用時間（72小時）和各實驗藥物濃度，用免疫細胞化學S-P（streptavidin-peroxidase）法測定細胞漿內COX-2的表達，培養(yǎng)同樣時間不加藥的細胞作對照組，比較實驗組與對照組細胞漿內COX-2的表達是否有差異。（4）選擇最佳的藥物作用時間（72小時）和各實驗藥物濃度，用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunoso

4、rbent assay，ELISA）測定細胞上清液中COX-2的含量變化，培養(yǎng)同樣時間不加藥物的細胞作對照組，比較實驗組與對照組細胞上清液中COX-2的含量是否有差異。（5）選擇最佳的藥物作用時間（72小時）和各實驗藥物濃度，用透射電鏡觀察細胞的形態(tài)變化，培養(yǎng)同樣時間不加藥的細胞作對照組，比較實驗組與對照組細胞形態(tài)是否有差異。結果：（1）當不同實驗濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞24小時后：1×10-7mol/L濃度組，1×10-6

5、mol/L濃度組分別與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），表明此兩濃度的ATRA作用細胞24小時后對細胞無明顯的抑制作用；1×10-5mol/L濃度組，1×10-4mol/L濃度組分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明此兩濃度的ATRA對細胞有明顯的抑制作用；相鄰各實驗組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。綜上，用不同濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞24小時后，當達到一定的藥物濃度時對細胞有抑制作

6、用。（2）當不同實驗濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞48小時后：1×10-7mol/L濃度組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），表明此濃度的ATRA作用細胞48小時后對細胞無明顯的抑制作用；1×10-6mol/L濃度組，1×10-5mol/L濃度組和1×10-4mol/L濃度組分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明這三個濃度的ATRA對細胞有明顯的抑制作用；相鄰各實驗組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0

7、.05）。綜上，用不同濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞48小時后，當達到一定的藥物濃度時對細胞有抑制作用，且隨著濃度增大抑制越明顯。（3）當不同實驗濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后：1×10-7mol/L濃度組，1×10-6mol/L濃度組，1×10-5mol/L濃度組，和1×10-4mol/L濃度組分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明各濃度的ATRA對細胞均有抑制作用；相鄰各實驗組之間比較，差異有

8、統(tǒng)計學意義（P<0.05）。綜上，用不同實驗濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后，隨著實驗組濃度的升高，抑制作用愈加明顯。（4）選擇不同實驗濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后，可見COX-2在細胞漿里的表達下降，并隨著實驗組濃度的升高，COX-2表達下降愈加明顯，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明COX-2可能參與了ATRA對細胞抑制的過程；相鄰各實驗組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（

9、5）選擇不同實驗濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后，各實驗組均可見A549細胞上清液中COX-2的含量下降，并隨著實驗組濃度的升高，COX-2含量下降愈加明顯，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），進一步表明COX-2可能參與了ATRA對細胞抑制的過程；相鄰各實驗組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（6）選擇不同濃度的ATRA作用肺腺癌A549細胞72小時后，透射電鏡下可見各實驗組的肺腺癌A549細胞表現(xiàn)為