普萘洛爾對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞MMP-9表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　通過(guò)對(duì)普萘洛爾作用于人肺腺癌A549細(xì)胞后其基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)表達(dá)變化的研究，并分析這種變化與普萘洛爾濃度的關(guān)系，來(lái)探討MMP-9成為肺癌治療中的一個(gè)新靶點(diǎn)的可行性，為肺癌的靶向治療提供一種新的思路。
　　研究方法：
　　(1)體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞。
　　(2)挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好且呈對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞，按照隨機(jī)對(duì)照原則分成實(shí)驗(yàn)組（給藥組）及對(duì)照組（空白組），對(duì)照組均給予含0ug/

2、ml的普萘洛爾細(xì)胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組分別給予5個(gè)不同濃度的普萘洛爾細(xì)胞培養(yǎng)液處理，具體的濃度為:實(shí)驗(yàn)組1:2ug/ml，實(shí)驗(yàn)組2:4ug/ml，實(shí)驗(yàn)組3:8ug/ml，實(shí)驗(yàn)組4:16ug/ml，實(shí)驗(yàn)組5:20ug/ml，每個(gè)相同濃度的組內(nèi)又分為三個(gè)小組，分別為培養(yǎng)后12h、24h及48h的小組，并為每個(gè)時(shí)間段的小組設(shè)置六個(gè)平行孔。
　　(3)培養(yǎng)完成后進(jìn)行測(cè)定:將細(xì)胞培養(yǎng)液離心，取上清液，應(yīng)用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（即

3、ELISA法），測(cè)量各組細(xì)胞對(duì)應(yīng)的人基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的水平。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　(1)顯微鏡下觀(guān)察
　　各組細(xì)胞在經(jīng)過(guò)含有不同濃度的普萘洛爾細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)后:同一濃度下培養(yǎng)后12h及24h后生長(zhǎng)狀態(tài)及細(xì)胞密度無(wú)明顯變化，但在培養(yǎng)48h后顯微鏡下觀(guān)察培養(yǎng)液中有大量漂浮的死亡細(xì)胞;不同濃度培養(yǎng)時(shí)同一時(shí)間段細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及細(xì)胞密度無(wú)明顯區(qū)別。
　　(2)生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定的

4、結(jié)果
　　與對(duì)照組相比，5個(gè)實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞經(jīng)過(guò)普萘洛爾細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)后，人肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞MMP-9的表達(dá)水平下降，且培養(yǎng)后12h＞培養(yǎng)后24h＞培養(yǎng)后48h。并且經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析結(jié)果:P＜0.05，說(shuō)明普萘洛爾濃度與培養(yǎng)時(shí)間段這兩個(gè)因素對(duì)所培養(yǎng)細(xì)胞MMP-9表達(dá)的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　實(shí)驗(yàn)組4(16ug/ml)與實(shí)驗(yàn)組5(20ug/ml)MMP-9的檢測(cè)濃度降低尤為明顯，且降低幅度實(shí)驗(yàn)組5＞實(shí)驗(yàn)組4，而實(shí)驗(yàn)組1、

5、2、3降低幅度小，組間比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明普萘洛爾濃度達(dá)到16ug/ml時(shí)對(duì)所培養(yǎng)細(xì)胞MMP-9的表達(dá)影響顯著，可以作為一個(gè)界定濃度，對(duì)科研工作有一定的指導(dǎo)意義。
　　結(jié)論：
　　(1)人肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞普遍表達(dá)MMP-9，MMP-9通過(guò)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅳ型膠原的特異性降解，影響肺腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，使肺癌發(fā)生肺內(nèi)轉(zhuǎn)移及其他部位轉(zhuǎn)移的可能性增加。
　　(2)普萘洛爾影響體外培養(yǎng)人肺腺癌A