轉(zhuǎn)錄因子Sp1對(duì)肺腺癌細(xì)胞A549中生存素的轉(zhuǎn)錄調(diào)控.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)錄因子-特異性蛋白1(specificity protein1,Sp1)在肺腺癌細(xì)胞A549中對(duì)生存素（survivin）轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用。
　　方法:1.免疫組化SP法檢測(cè)120例非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者和40例良性肺疾病患者手術(shù)標(biāo)本中survivin和Sp1蛋白的表達(dá)情況，并分析兩者表達(dá)的相關(guān)性。2.逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)人肺腺癌細(xì)胞株-A

2、549細(xì)胞中survivin和Sp1 mRNA的表達(dá)。3.在本室構(gòu)建好的含survivin核心啟動(dòng)子的熒光報(bào)告載體上,基因定點(diǎn)突變survivin核心啟動(dòng)子上經(jīng)電泳遷移率變動(dòng)分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)證實(shí)存在的-121bp~-116bp處的Sp1結(jié)合位點(diǎn)，并轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞中,測(cè)定螢光素酶的表達(dá)活性，比較survivin核心啟動(dòng)子片段及其突變體在A549細(xì)胞中的表達(dá)活性差

3、異。4.化學(xué)合成法構(gòu)建靶向Sp1基因的RNA小干擾片段(small interference RNA,siRNA),脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞,熒光定量RT-PCR及Western-blot法檢測(cè)Sp1及survivin mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:1.NSCLC組織中survivin和Sp1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.6％(98／120)和62.5％(75／120);良性肺疾病組織中兩者陽(yáng)性表達(dá)率分別為0和7.5%(3／40)

4、,二者表達(dá)呈正相關(guān)(rs'=0.214, P<0．05)。2. A549細(xì)胞中survivin和Sp1 mRNA均表達(dá)。3.含有survivin核心啟動(dòng)子（pGL3-SVP230-luc）及其突變體（pGL3-SVP231-luc）的螢光報(bào)告載體在 A549細(xì)胞中的活性，均高于陽(yáng)性對(duì)照組 pGL3-control和陰性對(duì)照組 pGL3-basic(p<0.05)。在 A549細(xì)胞中， pGL3-SVP230-luc的相對(duì)活性為40.99

5、;高于pGL3-SVP231-luc的25.94(p<0.05)。4.通過RNAi下調(diào)Sp1的表達(dá),能降低A549細(xì)胞中survivin mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:1.非小細(xì)胞肺癌組織中survivin蛋白和Sp1蛋白均高表達(dá)且二者表達(dá)呈正相關(guān)。2.A549細(xì)胞內(nèi)survivin和Sp1mRNA均高表達(dá)。3.survivin啟動(dòng)子上的Sp1結(jié)合位點(diǎn)-121bp~-116bp對(duì)其活性具有正性作用。4.靶向Sp1的siRNA,