肥大細(xì)胞在實驗性末端回腸炎發(fā)病中的變化及其意義.pdf

1、目的：
　　觀察實驗性末端回腸炎（ETI）發(fā)病過程中回腸末端肥大細(xì)胞(MC）增殖和凋亡的情況；探討肥大細(xì)胞在慢性末端回腸炎（CTI）發(fā)病過程中的作用。
　　方法：
　　選用雄性SD大鼠60只隨機分為對照組、縫線組、造模組，每組各20只。對照組只麻醉不手術(shù)，縫線組僅在回腸末端縫手術(shù)線，造模組則行回腸末端-盲腸側(cè)側(cè)吻合術(shù)。分批處死術(shù)后2、8周SD大鼠，距吻合口1-3cm處取末端回腸組織，肉眼觀察組織特征及鏡下觀察石蠟包埋切

2、片，并計數(shù)肥大細(xì)胞、脫顆粒程度，采用MTT法檢測肥大細(xì)胞增殖率和TUNEL法檢測肥大細(xì)胞凋亡數(shù)并分析。結(jié)果：
　　1、末端回腸組織的術(shù)后各期病理改變：
　　術(shù)后2周，縫線組和造模組肉眼觀察，均可見組織粘膜充血、水腫，病理切片顯示中性粒細(xì)胞明顯增多，為急性炎性反應(yīng)表現(xiàn)；術(shù)后8周，肉眼見造模組末端回腸腸管處狹窄、粘連，鏡下局部可見變短變粗的絨毛，并見充血、出血的粘膜，出現(xiàn)部分粘膜脫落、糜爛或淺潰瘍形成，可見擴張的乳糜管、淋巴管，

3、粘膜下組織結(jié)構(gòu)破壞，增生的毛細(xì)血管，和大量浸潤粘膜及粘膜下層的炎性細(xì)胞，以淋巴細(xì)胞為主?？p線組末端回腸組織未見明顯炎性細(xì)胞浸潤及結(jié)構(gòu)破壞，兩組對比有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2、肥大細(xì)胞數(shù)量的變化：
　　三組SD大鼠術(shù)后2、8周后肥大細(xì)胞數(shù)逐漸減少（F2周=63667.0，P2周=0.000；F8周=65363.0， P8周=0.000）；且造模組與縫線組相比細(xì)胞數(shù)亦減少（t2周造模=8781.082，P2周造模＜0

4、.001；t8周造模=106.670，P8周造模＜0.001）；同組在術(shù)后2周與8周進行肥大細(xì)胞數(shù)比較，結(jié)果為縫線組、造模組內(nèi)均減少（t縫線=39.183，P縫線＜0.001；t造模=55.347，P造模＜0.001）；而對照組數(shù)無明顯減少（t=1.143，P＞0.05）。實驗表明肥大細(xì)胞的數(shù)量在末端回腸炎的發(fā)病過程中有明顯的減少，并與炎癥程度呈正相關(guān)，即炎癥程度越重，肥大細(xì)胞數(shù)量減少越顯著。
　　3、肥大細(xì)胞形態(tài)：
　　一

5、般呈圓形，梭形或不規(guī)則形；實驗中正常組肥大細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞多呈圓形；造模、縫線組中肥大細(xì)胞呈圓形、梭形、不規(guī)則形等多種形態(tài)改變，細(xì)胞間質(zhì)可見多處點狀顆粒樣改變。
　　4、觀察肥大細(xì)胞脫顆粒程度的變化：
　　三組SD大鼠術(shù)后2、8周肥大細(xì)胞脫顆粒程度逐漸加重（χ22周=18.207，P2周=0.000；χ28周=24.348，P8周=0.000）；縫線組、造模組脫顆粒程度與對照組相比，均有明顯加重（P<0.05），且造模組與

6、縫線組之間程度也有加重（P<0.05）。且造模組脫顆粒程度較其余兩組更重。實驗表明肥大細(xì)胞的脫顆粒程度在末端回腸炎的發(fā)病過程中有明顯的加重，并與炎癥程度呈正相關(guān)，即炎癥程度越重，肥大細(xì)胞脫顆粒程度越重。
　　5、肥大細(xì)胞增殖和凋亡：
　　MTT法檢測細(xì)胞增殖率：在術(shù)后2、8周，24h、48h、72h、96h的增殖率逐漸下降（P<0.05）；縫線組、造模組與對照組相比增殖率均有降低（P<0.05），而造模組與縫線組增殖率變化的

7、情況相似（P＞0.05）。肥大細(xì)胞的增殖率在末端回腸炎的發(fā)病過程中有明顯的降低，并與炎癥程度呈負(fù)相關(guān)，即炎癥程度越重，肥大細(xì)胞增殖率降低越顯著。
　　TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡：細(xì)胞形態(tài)改變?yōu)槁褕A形，細(xì)胞核皺縮、固縮或核碎裂凋亡的改變，細(xì)胞核染色質(zhì)致密程度逐步增加，圖中細(xì)胞偏圓，染色亮的為凋亡細(xì)胞。從TUNEL檢測肥大細(xì)胞凋亡的圖可觀察到：與對照組相比，縫線組和造模組在第2周時，肥大細(xì)胞少量凋亡，第8周時，縫線組和造模組肥大細(xì)胞均可

8、見大量細(xì)胞凋亡，而且凋亡細(xì)胞造模組明顯多于縫線組。結(jié)果顯示隨著組織炎癥加重，肥大細(xì)胞凋亡增多。
　　6、凋亡DNA梯度條帶的變化：（DNA瓊脂糖凝膠電泳）對照組、縫線組及造模組2、8周時，收集的大鼠回腸肥大細(xì)胞進行小分子 DNA瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果表現(xiàn)出典型的“梯形”（200bp、400bp）條帶，但造模組200bp條帶較縫線組更明顯，表明造模組的細(xì)胞凋亡更為顯著。
　　結(jié)論：
　　1、肥大細(xì)胞的數(shù)量在CTI發(fā)病過程中