T細胞適配蛋白ADAP在小鼠心臟和小腸移植中的作用研究.pdf

1、移植免疫排異仍然是目前器官移植領域亟待解決的主要問題之一,臨床上移植物被排斥的免疫過程由幾個緊密相關的步驟參與完成,包括同種異體抗原的遞呈和識別;受體T細胞的激活和增殖,淋巴細胞浸潤到移植物中,最后由效應T細胞介導對移植物的損傷和破壞.在上述的這一系列過程中,T 細胞起到一個中心作用,而在 T 細胞激活、增殖和產(chǎn)生效應的各個階段都有整合素的參與,白細胞功能相關抗原-1(Leukocyte function associated anti

2、gen-1,LFA-1) 是分布最廣也是最重要的T細胞整合素,在T細胞黏附到血管內皮上,進入淋巴結與抗原遞呈細胞 (Antigen presenting cell,APC)接觸,為T 細胞活化提供共刺激信號,浸潤進入移植物等過程中起重要作用.LFA-1 的活性受到嚴格的調控,以決定 T 細胞與其他細胞之間的黏附性和T細胞的活化閾值.在參與調控LFA-1活性的諸多分子中,除了激酶和磷酸酶,新近發(fā)現(xiàn)的一組造血組織特異表達的適配蛋白在 T 細

3、胞信號途徑中起重要作用.該組適配蛋白本身不具有酶的活性或受體功能,但它擁有多個結合位點,可通過與其他蛋白的結合形成多蛋白信號復合體,因此一個適配蛋白可能調節(jié)多種細胞功能.黏附脫顆粒促進適配蛋白 (Adhesion and-DegranulationPromoting Adapter Protein,ADAP),就是這樣一種傳導 T 細胞受體(Tcell receptor,TCR)偶聯(lián)信號到LFA-1激活的適配蛋白分子,其在T細胞激活和增

4、殖中產(chǎn)生不可取代的作用.ADAP主要在T細胞和髓系細胞上表達,在TCR刺激后可被磷酸化.共有兩種不同分子量(120和130 kDa)的同功體存在,ADAP-120主要在胸腺 T 細胞上表達,而ADAP-130則主要在外周 T 細胞上表達.目前關于ADAP的主要功能已經(jīng)被闡明,ADAP主要正向調節(jié) TCR 偶聯(lián)到LFA-1 激活的信號傳導及其介導的細胞活化、增殖、IL-2 的產(chǎn)生和細胞黏附.以上的實驗結果是通過ADAP基因敲除(ADAP-

5、/-)小鼠和轉基因細胞正、反兩方面來證實的.另外,ADAP還調節(jié)β1整合素介導的細胞黏附以及TCR到細胞骨架蛋白重塑的信號傳導.關于LFA-1在移植免疫排異中的作用,已有大量報道,阻斷LFA-1活化及其與受體ICAM一1的結合能在多種移植模型中獲得移植物存活時間的延長,甚至能成功誘導耐受.根據(jù)ADAP在T細胞功能尤其是LFA-1激活中的重要調節(jié)作用,我們推測ADAP在器官移植免疫排異中有重要作用,但目前尚無這方面的報道,因此本研究在AD

6、AP-/-小鼠基礎上進行一系列的移植研究實驗,總體分為四個方面的探索: 一、從ADAP-/-小鼠分離淋巴細胞,以同種異體樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)作為刺激,模擬體內的排異刺激狀況,體外研究ADAP在淋巴細胞增殖反應中的作用. 二、建立體外和體內細胞毒淋巴細胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)體系,檢測ADAP在T細胞效應階段的作用. 三、以ADAP-/-小鼠作為受

7、者,以皮膚移植和心臟移植模型檢測ADAP在血管化和非血管化器官移植中的作用. 四、建立小鼠異位小腸移植模型,研究ADAP在免疫原性很強的小腸移植中的作用,聯(lián)合共刺激通道阻斷和ADAP基因缺失研究該方案在抑制小腸移植排異中的作用. 研究得出如下結論： 1、同種異體心臟和小腸移植物在ADAP缺失的受者中存活時間延長,但最終仍可引起免疫排異反應. 2、ADAP缺失對移植物的保護作用主要是通過抑制淋巴細胞