成釉蛋白在小鼠牙胚發(fā)育中的表達(dá)和作用研究.pdf

1、為進(jìn)一步明確成釉蛋白在牙齒發(fā)育中的作用,該研究采用分子生物學(xué)、器官培養(yǎng)、電鏡等方法,對(duì)AMBN的功能作了進(jìn)一步研究和探討,以期揭示AMBN影響牙齡發(fā)育的作用機(jī)制.該研究分兩個(gè)部分,具體內(nèi)容如下:1 AMBN在小鼠牙胚發(fā)育中的表達(dá):推測(cè),AMBN不參與牙齒發(fā)育早期(如成釉細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化等)的調(diào)控,但對(duì)釉質(zhì)基質(zhì)的形成和分泌起了重要的作用,AMBN不是組成牙本質(zhì)的蛋白,但參與了牙本質(zhì)形成過程,并在啟動(dòng)牙本質(zhì)基質(zhì)形成中具有信號(hào)分子作用

2、.2 AMBN反義核酸對(duì)體外培養(yǎng)牙胚發(fā)育的影響研究:為了明確AMBN在牙胚發(fā)育中的作用,我們用牙胚體外培養(yǎng)、反義核酸和電鏡等技術(shù),對(duì)小鼠牙胚發(fā)育中的AMBN功能進(jìn)行了研究.首先成功建立了昆明鼠牙胚體外培養(yǎng)體系,應(yīng)用的培養(yǎng)環(huán)境為BGJb無血清、無抗生素半固態(tài)培養(yǎng)體系,牙胚在體外培養(yǎng)最長(zhǎng)達(dá)20d,所建立的牙胚培養(yǎng)體系完整再現(xiàn)了牙胚從帽狀晚期或鐘狀早期到牙根開始形成這一主要的牙胚發(fā)育階段,成釉細(xì)胞也從內(nèi)釉上皮發(fā)育成具有分泌功能的成釉細(xì)胞,并出

3、現(xiàn)基質(zhì)的分泌,不僅如此,還在體外成功觀察到了上皮根鞘的形成和上皮隔結(jié)構(gòu);其次,設(shè)計(jì)合成了AMBN反義核酸,應(yīng)用所建立的牙胚體外培養(yǎng)體系,分別用光鏡和電鏡觀察了AMBN被反義核酸阻斷表達(dá)后小鼠牙胚發(fā)育的情況.經(jīng)用Western蛋白印跡檢測(cè)表明,所設(shè)計(jì)的反義核酸對(duì)AMBN mRNA具有良好的封閉效果并成功阻斷了牙胚對(duì)AMBN的表達(dá);在缺乏AMBN情況下,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組牙胚在體外可以繼續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育至鐘狀晚期,出現(xiàn)成釉細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞的分

4、化,成釉細(xì)胞可以分化成為分泌期型成釉細(xì)胞,胞漿中缺少合成蛋白質(zhì)所必需的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基氏體,缺乏溶酶體,表明對(duì)蛋白合成和降解的能力降低;實(shí)驗(yàn)組牙胚有牙尖形成和基質(zhì)分泌,但牙尖形態(tài)異常,基質(zhì)形成減少,牙尖周圍基質(zhì)(釉質(zhì)基質(zhì)和牙本質(zhì)基質(zhì))最厚處為0.6μm,明顯薄于對(duì)照組的5.5μm,基質(zhì)中膠原纖維粗細(xì)不等,排列稀疏,未見鈣化現(xiàn)象,充分證明了AMBN在牙胚發(fā)育中參與釉質(zhì)基質(zhì)形成和礦化過程,影響膠原纖維和牙本質(zhì)基質(zhì)的合成,促進(jìn)成釉細(xì)胞對(duì)蛋白