骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在同種心臟移植中對(duì)Treg細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過建立SD大鼠到Wistar大鼠腹腔心臟移植模型，術(shù)前經(jīng)外周靜脈輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，研究能否提高受體CD4+CD25+foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)含量，延長供心存活時(shí)間，并結(jié)合體外MSCs與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，揭示MSCs對(duì)Treg細(xì)胞作用的機(jī)理。
　　 方法：體外部分：采用體外MSCs與CD4+T細(xì)胞不同比例共培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)分組為：A組(CD4+T單獨(dú)培養(yǎng)組)、B組(MSCs單獨(dú)培養(yǎng)組)、C1組(MSCs/

2、CD4+T1:1)、C2組(MSCs/CD4+T1:10)、C3組(MSCs/CD4+T1:100)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的數(shù)量及Foxp3蛋白的表達(dá)量變化，ELISA方法測(cè)定上清液TGF-β1、IL-10、IL-2的變化。
　　 體內(nèi)部分：供體SD大鼠和受體Wistar大鼠各15只隨機(jī)分成三組，Ⅰ組(空白組)：僅行SD大鼠到Wistar大鼠異位同種腹腔心臟移植，在心臟

3、移植前和后不作任何處理。Ⅱ組(輸注PBS組)：受體Wistar大鼠心臟移植前5天經(jīng)頸靜脈輸注PBS。Ⅲ組(移植MSCs組)：受體Wistar大鼠心臟移植前第5天經(jīng)頸靜脈輸注培養(yǎng)擴(kuò)增的MSCs。觀測(cè)指標(biāo)：供心的存活時(shí)間、病理改變，受體Wistar大鼠體內(nèi)CD4+CD25+Treg細(xì)胞變化，以及血清TGF-β1、IL-10、IL-2變化等。
　　 結(jié)果：體外部分：(1)體外實(shí)驗(yàn)組CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例及Foxp3蛋白表達(dá)

4、檢測(cè)結(jié)果：A組：6.44±0.55％，77.90±2.93％；B組：0±0％，0±0％：C1組：65.98±3.11％，81.99±2.27％；C2組：51.92±1.86％，78.31±3.33％；C3組：30.52±3.40％，78.94±1.00％。CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例檢測(cè)結(jié)果，共培養(yǎng)組(C1、C2、C3)明顯高于A組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。Foxp3蛋白表達(dá)各組間無明顯差異，P>0.05。(2)體外實(shí)驗(yàn)組TG

5、F-β1檢測(cè)結(jié)果：A組：110.77±6.55 pg/mL，B組：396.34±6.48pg/mL，C1組：688.38±9.92 pg/mL，C2組：705.07±6.78 pg/mL，C3組：783.58±19.74pg/mL。C1、C2、C3組中上清液中TGF-β1濃度較A組、B兩組明顯升高，P<0.05。C1、C2、C3組之間無顯著性差異，P>0.05。(3)體外實(shí)驗(yàn)組IL-10檢測(cè)結(jié)果：A組：6.68±0.56 pg/mL，B

6、組：0±0 pg/mL，C1組：50.32±1.55 pg/mL，C2組：52.62±0.80 pg/mL，C3組：69.60±1.55 pg/mL。C1、C2、C3組中上清液中IL-10濃度較A組、B兩組明顯升高，P<0.05。C1、C2、C3組之間無顯著性差異，P>0.05。(4)體外實(shí)驗(yàn)組IL-2檢測(cè)結(jié)果：A組：11.98±0.38 pg/mL，B組：0±0 pg/mL，C1組：4.43±0.19 pg/mL，C2組：3.89±0

7、.60 pg/mL，C3組：3.84±0.63 pg/mL。C1、C2、C3組中IL-2濃度較A組、B兩組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。C1、C2、C3組之間無顯著性差異，P>0.05。
　　 體內(nèi)部分：(1)供心平均存活時(shí)間(MST)：Ⅰ組：6.0±0.71天，H組：5.8±0.84天，Ⅲ組：17.0±0.71天。Ⅲ組平均存活時(shí)間較Ⅰ、Ⅱ組明顯延長，有顯著性差異，P<0.05。(2)受體外周血CD4+CD25+Treg

8、細(xì)胞及Foxp3蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果：Ⅰ組：2.18±0.36％，72.84±1.91％：Ⅱ組：2.46±0.44％，72.48±2.37％；Ⅲ組：8.72±0.68％，73.2±1:2.78％。CD4+CD25+Treg細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果，C組明顯高于A組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。Foxp3蛋白表達(dá)各組間無明顯差異，P>0.05。(3).受體外周血TGF-β1檢測(cè)結(jié)果：Ⅰ組：165.73±8.43 pg/mL，Ⅱ組：178.75±9.02

9、pg/mL，Ⅲ組：341.76±13.82pg/mL。Ⅲ組較Ⅰ、Ⅱ組明顯增多，有顯著性差異，P<0.05。(4).受體外周血IL-10檢測(cè)結(jié)果：Ⅰ組：16.20±0.61 pg/mL，Ⅱ組：18.81±0.42 pg/mL，Ⅲ組：47.38±1.38 pg/mL。Ⅲ組較Ⅰ、Ⅱ組明顯增多，有顯著性差異，P<0.05。(5)受體外周血IL-2檢測(cè)結(jié)果：Ⅰ組：90.34±3.43 pg/mL，Ⅱ組：85.90±1.67 pg/mL，Ⅲ組：44

10、.85±3.39 pg/mL。Ⅲ組較Ⅰ、Ⅱ組明顯減少，有顯著性差異，P<0.05。
　　 結(jié)論：1、CD4+T與MSCs共培養(yǎng)后，可明顯提高CD4+CD2+Treg的比例，且具有MSCs劑量相關(guān)性，但對(duì)Foxp3蛋白的表達(dá)無明顯促進(jìn)作用。
　　 2、外周靜脈移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)可以使體內(nèi)CD4+CD25+foxp3+Treg細(xì)胞增加，顯著延長同種心臟移植物的存活時(shí)間。
　　 3、MSCs與Treg細(xì)胞