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1、目的:通過建立SD大鼠到Wistar大鼠腹腔心臟移植模型,術(shù)前經(jīng)外周靜脈輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,研究能否提高受體CD4+CD25+foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)含量,延長供心存活時(shí)間,并結(jié)合體外MSCs與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),揭示MSCs對(duì)Treg細(xì)胞作用的機(jī)理。
方法:體外部分:采用體外MSCs與CD4+T細(xì)胞不同比例共培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)分組為:A組(CD4+T單獨(dú)培養(yǎng)組)、B組(MSCs單獨(dú)培養(yǎng)組)、C1組(MSCs/
2、CD4+T1:1)、C2組(MSCs/CD4+T1:10)、C3組(MSCs/CD4+T1:100),倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的數(shù)量及Foxp3蛋白的表達(dá)量變化,ELISA方法測(cè)定上清液TGF-β1、IL-10、IL-2的變化。
體內(nèi)部分:供體SD大鼠和受體Wistar大鼠各15只隨機(jī)分成三組,Ⅰ組(空白組):僅行SD大鼠到Wistar大鼠異位同種腹腔心臟移植,在心臟
3、移植前和后不作任何處理。Ⅱ組(輸注PBS組):受體Wistar大鼠心臟移植前5天經(jīng)頸靜脈輸注PBS。Ⅲ組(移植MSCs組):受體Wistar大鼠心臟移植前第5天經(jīng)頸靜脈輸注培養(yǎng)擴(kuò)增的MSCs。觀測(cè)指標(biāo):供心的存活時(shí)間、病理改變,受體Wistar大鼠體內(nèi)CD4+CD25+Treg細(xì)胞變化,以及血清TGF-β1、IL-10、IL-2變化等。
結(jié)果:體外部分:(1)體外實(shí)驗(yàn)組CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例及Foxp3蛋白表達(dá)
4、檢測(cè)結(jié)果:A組:6.44±0.55%,77.90±2.93%;B組:0±0%,0±0%:C1組:65.98±3.11%,81.99±2.27%;C2組:51.92±1.86%,78.31±3.33%;C3組:30.52±3.40%,78.94±1.00%。CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例檢測(cè)結(jié)果,共培養(yǎng)組(C1、C2、C3)明顯高于A組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。Foxp3蛋白表達(dá)各組間無明顯差異,P>0.05。(2)體外實(shí)驗(yàn)組TG
5、F-β1檢測(cè)結(jié)果:A組:110.77±6.55 pg/mL,B組:396.34±6.48pg/mL,C1組:688.38±9.92 pg/mL,C2組:705.07±6.78 pg/mL,C3組:783.58±19.74pg/mL。C1、C2、C3組中上清液中TGF-β1濃度較A組、B兩組明顯升高,P<0.05。C1、C2、C3組之間無顯著性差異,P>0.05。(3)體外實(shí)驗(yàn)組IL-10檢測(cè)結(jié)果:A組:6.68±0.56 pg/mL,B
6、組:0±0 pg/mL,C1組:50.32±1.55 pg/mL,C2組:52.62±0.80 pg/mL,C3組:69.60±1.55 pg/mL。C1、C2、C3組中上清液中IL-10濃度較A組、B兩組明顯升高,P<0.05。C1、C2、C3組之間無顯著性差異,P>0.05。(4)體外實(shí)驗(yàn)組IL-2檢測(cè)結(jié)果:A組:11.98±0.38 pg/mL,B組:0±0 pg/mL,C1組:4.43±0.19 pg/mL,C2組:3.89±0
7、.60 pg/mL,C3組:3.84±0.63 pg/mL。C1、C2、C3組中IL-2濃度較A組、B兩組明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。C1、C2、C3組之間無顯著性差異,P>0.05。
體內(nèi)部分:(1)供心平均存活時(shí)間(MST):Ⅰ組:6.0±0.71天,H組:5.8±0.84天,Ⅲ組:17.0±0.71天。Ⅲ組平均存活時(shí)間較Ⅰ、Ⅱ組明顯延長,有顯著性差異,P<0.05。(2)受體外周血CD4+CD25+Treg
8、細(xì)胞及Foxp3蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果:Ⅰ組:2.18±0.36%,72.84±1.91%:Ⅱ組:2.46±0.44%,72.48±2.37%;Ⅲ組:8.72±0.68%,73.2±1:2.78%。CD4+CD25+Treg細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果,C組明顯高于A組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。Foxp3蛋白表達(dá)各組間無明顯差異,P>0.05。(3).受體外周血TGF-β1檢測(cè)結(jié)果:Ⅰ組:165.73±8.43 pg/mL,Ⅱ組:178.75±9.02
9、pg/mL,Ⅲ組:341.76±13.82pg/mL。Ⅲ組較Ⅰ、Ⅱ組明顯增多,有顯著性差異,P<0.05。(4).受體外周血IL-10檢測(cè)結(jié)果:Ⅰ組:16.20±0.61 pg/mL,Ⅱ組:18.81±0.42 pg/mL,Ⅲ組:47.38±1.38 pg/mL。Ⅲ組較Ⅰ、Ⅱ組明顯增多,有顯著性差異,P<0.05。(5)受體外周血IL-2檢測(cè)結(jié)果:Ⅰ組:90.34±3.43 pg/mL,Ⅱ組:85.90±1.67 pg/mL,Ⅲ組:44
10、.85±3.39 pg/mL。Ⅲ組較Ⅰ、Ⅱ組明顯減少,有顯著性差異,P<0.05。
結(jié)論:1、CD4+T與MSCs共培養(yǎng)后,可明顯提高CD4+CD2+Treg的比例,且具有MSCs劑量相關(guān)性,但對(duì)Foxp3蛋白的表達(dá)無明顯促進(jìn)作用。
2、外周靜脈移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)可以使體內(nèi)CD4+CD25+foxp3+Treg細(xì)胞增加,顯著延長同種心臟移植物的存活時(shí)間。
3、MSCs與Treg細(xì)胞
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