Resistin及其結(jié)合多肽（RBP）干預(yù)脂肪組織、脂肪細(xì)胞的功能研究.pdf

1、現(xiàn)已知，胰島素抵抗是2型糖尿病的重要特征和前提，而肥胖則是2型糖尿病的一個重要危險因素。長期以來人們一直認(rèn)為肥胖患者脂肪細(xì)胞功能異常與胰島素抵抗的形成密切相關(guān)，并試圖從脂肪組織中篩選胰島素抵抗候選基因作為2型糖尿病防治的靶標(biāo)。Resistin(簡稱Retn)，是2001年Steppan等人通過小鼠脂肪組織差減雜交實驗發(fā)現(xiàn)的一種胰島素抵抗候選基因。該基因較特異地表達(dá)于白色脂肪組織中，肥胖小鼠體內(nèi)的血漿Resistin水平顯著升高，并引起小

2、鼠胰島素抵抗，因此Resistin被認(rèn)為是聯(lián)結(jié)肥胖和糖尿病的一個中介分子。 Resistin結(jié)合多肽(ResistinBindingPeptide，RBP)是本研究小組于2003年通過噬菌體表面展示技術(shù)(phagedisplay)篩選出的可以與Resistin結(jié)合的蛋白，并通過RBP過表達(dá)技術(shù)發(fā)現(xiàn)RBP可以拮抗Resistin促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的作用，提示RBP可能成為Resistin的拮抗劑，從而在抗糖尿病多肽藥物開

3、發(fā)中發(fā)揮著重要作用。 然而，有關(guān)Resistin與RBP的功能研究均不十分徹底，為深入探討Resistin在胰島素抵抗中的作用以及RBP對其功能的影響，本文分別以體外培養(yǎng)的脂肪組織、脂肪細(xì)胞為研究工具，通過兩部分研究，來闡明Resistin致胰島素抵抗的可能機(jī)制及RBP對Resistin功能的影響。 第一部分：Resistin及RBP干預(yù)大鼠白色脂肪組織的功能研究 目的：①觀察大鼠重組Resistin蛋白(rRe

4、sistin)對脂肪組織脂質(zhì)分解、內(nèi)分泌功能的影響；②探討RBP對rResistin上述功能的影響。 方法：采用臺盼藍(lán)排斥試驗，確定理想的RBP干預(yù)濃度；建立大鼠脂肪組織體外培養(yǎng)的方法，在此基礎(chǔ)上分別或共同采用rResistin(30ng/ml)、不同濃度RBP(10-12mol/l、10-10mol/l、10-8mol/l)干預(yù)24小時；采用全自動生化儀終點法觀察干預(yù)前后脂肪組織freefattyacids(FFAs)的含量；

5、ELISA法檢測脂肪組織培養(yǎng)上清中adiponectin、TNF-α的蛋白含量；采用RT-PCR技術(shù)檢測培養(yǎng)脂肪組織中adiponectin、TNF-α基因的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)論①大鼠重組Resistin蛋白可顯著影響白色脂肪組織的脂質(zhì)代謝和內(nèi)分泌功能；②RBP可有效拮抗Resistin的作用。 第二部分：Resistin及RBP干預(yù)3T3-L1脂肪細(xì)胞的功能研究 目的：①觀察Resistin對3T3-L1脂

6、肪細(xì)胞分化、脂代謝、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(glucosetransporter4，GLUT-4)基因mRNA表達(dá)的影響；②探討RBP對Resistin上述功能的影響。 方法：①構(gòu)建大鼠resistin真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染3T3-L1前體脂肪細(xì)胞，獲得穩(wěn)定表達(dá)resistin基因的細(xì)胞株；②采用油紅O染色，觀察脂肪細(xì)胞分化及脂質(zhì)積聚情況；③采用RT-PCR技術(shù)，檢測脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志基因(pref-1、C/EBPα、FAS)及GLUT-4基