丹參素-半胱氨酸綴合物的心血管保護作用初步研究.pdf

1、[目的]心血管疾病仍是目前危害人類健康的主要疾病。丹參是具有心血管保護作用的傳統(tǒng)中藥。丹參素是中藥丹參中的主要水溶性成分，化學名為D-(+)-（3，4-二羥基苯基）乳酸，是丹參中已經用于人類臨床實驗的有效單體。對丹參素進行結構改造后，將丹參素衍生物和半胱氨酸類似物綴合后，得到了一系列新型化合物。本課題研究了這一系列新型化合物的心血管保護作用及其可能的作用機制。
　　[方法]本實驗通過過氧化氫(H2O2)刺激人臍靜脈內皮細胞(HUV

2、EC)造成的氧化應激模型，對一系列新合成的丹參素-半胱氨酸類似物的綴合物進行活性篩選。當細胞在各實驗用無菌培養(yǎng)板中生長到90％左右的密度時，換無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4-6h，然后藥物處理組分別加入陽性藥NAC（N-乙酰半胱氨酸，終濃度為5 mmol/L）以及各丹參素-半胱氨酸綴合物（終濃度分別為5×10-6 mol/L，5×10-5 mol/L，10-4 mol/L），作用4h，藥物處理組和氧化應激模型組加入H2O2水刺激（H2O2終濃度

3、為200μmol/L），造成氧化應激狀態(tài)。10-12h后進行各項處理和相關指標的檢測。MTT檢測細胞活力;測定LDH漏出率;測定抗氧化酶指標，MDA，GSH; JC-1法測細胞線粒體膜電位，Hoechst染色和AnnexinⅤ-FITC/PI檢測細胞凋亡情況;Western Blot檢測細胞凋亡相關的蛋白（Bcl-2，Bax，P53，Caspase-9，Caspase-3和PARP）表達情況。
　　[結果]從一系列新型綴合物中找到

4、了5個具有保護效果的化合物分別為酰胺類綴合物3a/4a/17a和硫酯類綴合物6a-b。在過氧化氫(H2O2)刺激后，以上化合物處理組的細胞存活率比未經藥物處理組要高，而LDH漏出率則比未經藥物處理組低。在過氧化氫(H2O2)刺激后，模型組的脂質過氧化物丙二醛(MDA)含量升高，抗氧化物谷胱甘肽(GSH)的活力降低，而化合物3a/4a/17a和6a-b的處理，則能降低MDA的含量，升高GSH的活力。Hoechst染色和流式AnnexinⅤ

5、-FITC/PI染色實驗結果顯示，化合物4a具有明顯的抑制細胞凋亡的作用。JC-1線粒體膜電位檢測實驗和Western Blot方法對凋亡相關蛋白的檢測結果顯示，化合物4a對線粒體凋亡途徑有較好的保護作用。它可以抑制線粒體膜電位的下降，提高抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，降低促凋亡蛋白Bax和P53的表達，抑制促凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3的活化和PARP的斷裂。
　　[結論]本研究發(fā)現(xiàn)，酰胺類綴合物3a/4a/17