甜菜堿對同型半胱氨酸致血管內皮細胞損傷的保護作用.pdf

1、目的：
　　 研究甜菜堿(Bet)對高濃度同型半胱氨酸(Hcy)誘導的血管內皮細胞(HUVECs)損傷是否具有保護作用;探討其對凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax表達的影響;測定Bet對SOD活性、MDA含量及上清液中NO含量的影響,探討B(tài)et是否通過抗氧化作用來拮抗Hcy誘導的HUVECs損傷。
　　 方法：
　　 用含15％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)HUVECs細胞株,當細胞融合至80％時,用免疫熒光

2、技術鑒定并傳代。培養(yǎng)至第三代后,取對數生長期的細胞分成5組:(1)正常對照組:加入等體積的培養(yǎng)液;(2)Hcy損傷組:1mmol/LHcy;(3)Bet低濃度組:1mmol/LHcy+10mmol/LBet;(4)Bet中濃度組:1mmol/LHcy+25mmol/LBet;(5)Bet高濃度組:1mmol/LHcy+50mmol/LBet。各組孵育24h后,采用形態(tài)學觀察法和MTT法檢測細胞的增殖存活;以流式細胞技術檢測細胞凋亡率;利

3、用免疫細胞化學法和Western-Blotting法檢測細胞內凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達量的變化;用相應的試劑盒分別檢測細胞中SOD活性、MDA含量以及細胞培養(yǎng)液中NO含量。
　　 結果：
　　 免疫熒光化學法檢測顯示,細胞呈陽性反應,確保了細胞株來源的可靠性。高濃度的Hcy可明顯抑制HUVECs的生長,誘導細胞凋亡。Bet可以降低損傷細胞的生長抑制率和凋亡率,提高Bcl-2蛋白的表達而使Bax的表達明顯減少

4、,免疫細胞化學結果與Western-blotting法的結果一致。此外,Bet對高濃度Hcy誘導的HUVECs損傷具有保護作用,Bet可以顯著升細胞中SOD的活性、降低MDA的含量,升高NO的含量。
　　 結論：
　　 1高濃度的Hcy可抑制細胞生長,促進細胞凋亡;Bet能夠降低凋亡率、增加細胞活性,降低Hcy造成的損傷。
　　 2Bet能夠升高Bcl-2蛋白表達、降低Bax蛋白表達,通過調控凋亡相關蛋白來抑制H