淫羊藿苷的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)用維生素D3(VitD3)+高脂飲食造成早期大鼠動(dòng)脈粥樣硬化(AS)模型，觀察淫羊藿苷的抗AS作用，以及對(duì)血脂及細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)和血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)的影響；通過(guò)體外培養(yǎng)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，研究淫羊藿苷對(duì)炎癥因子TNF—α誘導(dǎo)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的影響，以及對(duì)TNF—α誘導(dǎo)后Ca2+濃度的影響。 方法：(1)采用一次性注射VitD3后，高脂飲食喂養(yǎng)7周，造成早期大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模

2、型，淫羊藿苷(100mg/kg、200mg/kg)連續(xù)灌胃4周后取血測(cè)血脂；取主動(dòng)脈弓進(jìn)行組織切片、HE染色；取胸主動(dòng)脈，一部分進(jìn)行油紅O染色，觀察淫羊藿苷的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，另一部分用于制備組織勻漿抽提RNA，Realtime—PCR方法比較ICAM-1和VCAM-1mRNA的表達(dá)。(2)分離培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，運(yùn)用Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫細(xì)胞化學(xué)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)TNF—α誘導(dǎo)后，MTT法觀察不同濃度淫羊藿苷處理對(duì)細(xì)胞增殖的

3、影響，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞表面黏附分子抗原，激光掃描共聚焦顯微系統(tǒng)和Fluo—4/AM熒光探針標(biāo)記技術(shù)測(cè)定單細(xì)胞游離Ca2+濃度。 結(jié)果：(1)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，VitD3+高脂飲食可使大鼠血清總膽固醇(TC：3.7±0.51mmol/L)、低密度脂蛋白(LDL：1.57±0.28mmol/L)明顯升高；兩個(gè)淫羊藿苷干預(yù)組的TC，LDL明顯降低，TC分別為3.02±0.90mmol/L，2.98±0.21mmol/L；LDL分別為1

4、.04±0.79mmol/L，0.91±0.16mmol/L；而淫羊藿苷處理對(duì)于高密度脂蛋白(HDL)沒(méi)有顯著影響；甘油三酯(TG)水平各組間差異有顯著性意義，其中模型組最高，而給予高劑量淫羊藿苷組最低。大體標(biāo)本油紅O染色結(jié)果表明，模型組動(dòng)物血管有散在斑塊；而正常組及兩個(gè)給藥組未見(jiàn)明顯斑塊。主動(dòng)脈組織切片及HE染色結(jié)果表明，模型組血管壁出現(xiàn)早期AS病理改變，而兩個(gè)給藥組沒(méi)有明顯改變。從Realtime—PCR的結(jié)果得知，模型組動(dòng)物血管壁

5、ICAM-1、VCAM-1mRNA表達(dá)顯著高于正常組，相對(duì)值分別為0.00404±0.00028和0.00861±0.00167，而給予淫羊藿苷干預(yù)可使ICAM-1mRNA表達(dá)顯著降低(兩個(gè)劑量組相對(duì)值分別為：0.00291±0.00033和0.00250±0.00018)，對(duì)VCAM-1mRNA的表達(dá)無(wú)顯著影響。(2)結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞在倒置顯微鏡下的形態(tài)學(xué)特征及Ⅷ因子相關(guān)抗原鑒定結(jié)果，確認(rèn)分離培養(yǎng)的為血管內(nèi)皮細(xì)胞。0.1mg/L、5mg/

6、L、20mg/L的淫羊藿苷處理對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)顯著影響。靜息的內(nèi)皮細(xì)胞表面只表達(dá)少量的ICAM-1和VCAM-1，吸光度(absorption，A)值分別為0.115±0.021、0.085±0.002。經(jīng)炎癥因子TNF—α誘導(dǎo)后，ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)明顯增強(qiáng)，A值分別為0.452±0.069、0.252±0.025。1mg/L、10mg/L和20mg/L的淫羊藿苷抑制了ICAM-1的表達(dá)并呈濃度依賴趨勢(shì)，A值分別為0.389±

7、0.022，0.215±0.066和0.149±0.019。而0.1mg/L的淫羊藿苷對(duì)ICAM-1的表達(dá)無(wú)顯著影響。以上四個(gè)濃度的淫羊藿苷處理對(duì)VCAM-1的表達(dá)均無(wú)顯著影響。TNF—α可使單細(xì)胞游離Ca2+的濃度增高，熒光強(qiáng)度增加(137.681±23.886)，而0.1mg/L、5mg/L和20mg/L的淫羊藿苷處理對(duì)單細(xì)胞游離Ca2+的濃度增高無(wú)顯著影響，熒光強(qiáng)度改變無(wú)顯著性差異。 結(jié)論：CAMs的表達(dá)與AS密切相關(guān)，淫