馬蹄金高頻再生體系建立及遺傳轉(zhuǎn)化體系初探.pdf

1、馬蹄金(Dichondra repens Forst.)，為旋花科馬蹄金屬多年生草本植物，因其具有多種優(yōu)良特性，被廣泛用于園林綠化。但在運(yùn)用過程中也存在一些不足，如在冬季較低溫度下，葉片易枯黃；夏季易感染白絹病和葉斑病;葉片較嫩，汁液含量高，受黏蟲侵害十分嚴(yán)重，易受雜草危害等。本實(shí)驗(yàn)的目的是以馬蹄金的子葉為試材，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)愈傷組織和不定芽的形成進(jìn)行初步研究，建立馬蹄金穩(wěn)定、高頻的再生體系；同時(shí)采用農(nóng)桿菌侵染方法，探討影響轉(zhuǎn)化的

2、因素，初步建立起馬蹄金的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，為其誘變育種，細(xì)胞工程操作和基因工程操作莫定基礎(chǔ)，從而促進(jìn)品種改良，使其更好地用于生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.建立以子葉為外植體的高頻再生體系以馬蹄金子葉為外植體，研究了不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類的組合及濃度的配比對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)、分化的影響，結(jié)果表明：含2，4-D、NAA、IAA和細(xì)胞分裂索6-BA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)頻率差別不明顯，誘導(dǎo)率均達(dá)80～100％，但愈傷組織的質(zhì)地卻有很大的不同

3、，以0.1mg/LNAA+5.0mg/L6-BA和0.5mg/LIAA+1.5mg/L6-BA效果較好，其中0.5mg/LIAA+1.5mg/L6-BA可直接誘導(dǎo)出不定芽,誘導(dǎo)率高達(dá)82.61％;AgNO3對(duì)愈傷組織的分化起著重要的作用,以0.1mg/LNAA+3.0mg/L6-BA+2.0 mg/L AgNO3分化的效果最好，分化頻率高達(dá)76％：最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5mg/LIBA，生根率可達(dá)100％。 2.初步

4、建立了以子葉為受體的馬蹄金遺傳轉(zhuǎn)化體系在馬蹄金遺傳轉(zhuǎn)化過挫中，對(duì)影響其轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行了比較詳細(xì)的試驗(yàn)，初步建立了馬蹄金的遺傳轉(zhuǎn)化體系。根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)，確定轉(zhuǎn)化最優(yōu)條件如下：將8-10d子葉在MS+0.1 mg/L NAA+5.0 mg/L6-BA中預(yù)培養(yǎng)2-3d備用；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期OD值為0.6-0.8農(nóng)桿菌菌液離心，再用液體MS重懸至OD值為0.2-0.3，同時(shí)加入100 u mol/L乙酰丁香酮，侵染預(yù)培養(yǎng)子葉3～5min，

5、濾紙吸干多余的菌液，接種于MS+0.1mg/LNAA+5.0mg/L6-BA+100 μmol/LAS的共培養(yǎng)基中(培養(yǎng)基上添加濾紙)，光培養(yǎng)(全天光照)3-4d，脫菌(添加200mg/LCef的MS)2h,轉(zhuǎn)入MS+0.1mg/LNAA+5.0mg/L6-BA+30m/LCef中進(jìn)行延遲培養(yǎng)，2-3d后，轉(zhuǎn)入MS+0.1mg/L,NAA+5.0mg/L6-BA+5mg/LKm+30mg/LCef誘導(dǎo)篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待分化出抗性愈傷組